一种抗血小板溶栓素在制备治疗低剪切力条件下血管栓塞性疾病的药物中的应用

摘要

本发明涉及医药领域，尤其涉及一种抗血小板溶栓素在制备治疗低剪切力条件下血管栓塞性疾病的药物中的应用。由于先前的观点认为抗血小板溶栓素对血小板聚集的抑制作用是通过抑制GPIb与VWF在高剪切力条件下相互作用实现的。因此，此前的研究结果中并不认为低剪切力条件下抗血小板溶栓素能够同样起到抑制血小板聚集的作用。可见，本发明提供的抗血小板溶栓素的用途，与现有技术中公布的用途作用机理不相同。实验表明，低剪切力（300s-1）作用下，抗血小板溶栓素抑制活体外灌注室内人或鼠全血中血小板粘附、聚集和血栓形成。

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，尤其涉及一种抗血小板溶栓素在制备治疗低剪切力条件下血管栓塞性疾病的药物中的应用。 

背景技术

本发明所述抗血小板溶栓素(Antiplatelet thrombolysin，APT)是从尖吻蝮蛇蛇毒中分离出来的一种蛋白水解酶，由α链、β链两条肽链组成，α链氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，β链氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。 

目前的研究结果表明，抗血小板溶栓素具有明显的溶解纤维蛋白原和抑制血小板聚集的作用。其中，抗血小板溶栓素对血小板聚集的抑制作用主要是通过抑制GPIb与VWF相互作用，GPIb是血小板表面最主要的糖蛋白之一，它只介导血小板在高剪切力作用下的粘附。VWF是血管性血友病因子的缩写，常染色体遗传的VWF数量和/或结构异常导致的常见出血性疾病，以出血倾向、出血时间延长、血小板粘附功能下降，伴或不伴Ⅷ因子数量和/或功能异常为主要临床特点。剪切力是指血液流动时与血管壁内膜面的摩擦力。GPIb与血浆或血管内皮细胞的VWF在高剪切力条件下相互作用，降低血小板的流速。GPIb与VWF特异性结合，使血小板粘附到血管壁上，同时激活了其它受体的反应，包括激活GP II b/IIIα受体，使之与纤维蛋白原的结合，导致血小板聚集，从而引起血栓的形成。因此，通过阻断GPIb与血浆VWF结合，可阻止血小板粘附在血管内皮细胞壁上，抑制血小板聚集。 

可见，现有的研究结果表明，抗血小板溶栓素对血小板聚集的抑制作用是通过抑制GPIb与VWF在高剪切力条件下相互作用实现的。因此，并不认为低剪切力条件下抗血小板溶栓素能够同样起到抑制血小板聚集的作用。 

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种抗血小板溶栓素在制备治疗低剪切力条件下血管栓塞性疾病的药物中的应用，本发明发现，抗血 小板溶栓素在低剪切力条件下，仍能够起到抑制血小板聚集的作用，从而达到治疗血管栓塞性疾病的目的。 

本发明提供了一种抗血小板溶栓素在制备治疗低剪切力条件下血管栓塞性疾病的药物中的应用，抗血小板溶栓素由α链、β链两条肽链组成，其中，α链氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，β链氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。 

由于现有的研究结果中，抗血小板溶栓素对血小板聚集的抑制作用是通过抑制GPIb与VWF在高剪切力条件下相互作用实现的。因此，抗血小板溶栓素对低剪切力条件下血管栓塞性疾病的治疗作用并非通过抑制GPIb蛋白与VWF相互作用实现的。 

作为优选，低剪切力条件下血管栓塞性疾病为静脉回流减慢导致的血管性栓塞疾病。 

优选的，低剪切力条件下血管栓塞性疾病为深静脉血栓形成。 

深静脉血栓形成是指血液在深静脉腔内不正常地凝结，静脉回流减慢是深静脉血栓形成的主要原因之一。本申请的实施例证明该抗血小板溶栓素在低剪切力下具有抗血栓作用，从而证明其具有抗深静脉血栓形成的治疗作用。 

作为优选，本发明提供的治疗低剪切力条件下血管栓塞性疾病的药物为化学药物或生物制剂。 

作为优选，治疗低剪切力条件下血管栓塞性疾病的药物，包括抗血小板溶栓素与药学上可接受的辅料。 

优选的，本发明提供的治疗低剪切力条件下血管栓塞性疾病的药物为口服制剂或注射剂。 

更优选的，治疗低剪切力条件下血管栓塞性疾病的口服制剂为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、滴丸剂、微囊剂或微丸剂。 

更优选的，治疗低剪切力条件下血管栓塞性疾病的注射剂中抗血小板溶栓素的质量-体积浓度为6μg/mL。 

本发明提供了一种抗血小板溶栓素在制备治疗低剪切力条件下血管栓塞性疾病的药物中的应用。由于先前的观点认为抗血小板溶栓素对血小板聚集的抑制作用是通过抑制GPIb与VWF在高剪切力条件下相互作用实现的。因此，此前的研究结果中并不认为低剪切力条件下抗血小板溶栓素能够同样起到抑制血小板聚集的作用。可见，本发明提供的抗血小板溶栓素的用途，与 现有技术中公布的用途作用机理不相同。实验表明，低剪切力（300s^-1）作用下，抗血小板溶栓素抑制活体外灌注室内人或鼠全血中血小板粘附、聚集和血栓形成。 

附图说明

图1示阴性对照组中鼠血小板粘附、聚集和血栓形成效果，其中，图1（a）示灌注1min后，阴性对照组中鼠血小板粘附、聚集和血栓形成效果，图1（b）示灌注2min后，阴性对照组中鼠血小板粘附、聚集和血栓形成效果，图1（c）示灌注3min后，阴性对照组中鼠血小板粘附、聚集和血栓形成效果； 

图2示活性药物组中鼠血小板粘附、聚集和血栓形成效果，其中，图2（a）示灌注1min后，活性药物组中鼠血小板粘附、聚集和血栓形成效果，图2（b）示灌注2min后，活性药物组中鼠血小板粘附、聚集和血栓形成效果，图2（c）示灌注3min后，活性药物组中鼠血小板粘附、聚集和血栓形成效果； 

图3示灌流过程中鼠血小板平均荧光强度随时间变化情况，阴影区域表示标准误（SEM），其中，曲线1示阴性对照组鼠血小板平均荧光强度随时间变化情况，曲线2示活性药物组鼠血小板平均荧光强度随时间变化情况; 

图4示阴性对照组中人血小板粘附、聚集和血栓形成效果，其中，图4（a）示灌注1min后，阴性对照组中人血小板粘附、聚集和血栓形成效果，图4（b）示灌注2min后，阴性对照组中人血小板粘附、聚集和血栓形成效果，图4（c）示灌注3min后，阴性对照组中人血小板粘附、聚集和血栓形成效果； 

图5示活性药物组中人血小板粘附、聚集和血栓形成效果，其中，图5（a）示灌注1min后，活性药物组中人血小板粘附、聚集和血栓形成效果，图5（b）示灌注2min后，活性药物组中人血小板粘附、聚集和血栓形成效果，图5（c）示灌注3min后，活性药物组中人血小板粘附、聚集和血栓形成效果； 

图6示灌流过程中人血小板平均荧光强度随时间变化情况，阴影区域表示SEM，其中，曲线1示阴性对照组人血小板平均荧光强度随时间变化情况， 曲线2示活性药物组人血小板平均荧光强度随时间变化情况。 

具体实施方式

本发明提供了一种抗血小板溶栓素在制备治疗低剪切力条件下血管栓塞性疾病的药物中的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。 

本发明采用的试剂皆为普通市售品，皆可于市场购得。 

下面结合实施例，进一步阐述本发明： 

实施例1：抗血小板溶栓素对活体外灌注室内鼠全血中血小板粘附、聚集和血栓形成的作用 

取含有肝素抗凝（25U/mL）的鼠全血与荧光染料DiOC6（1μM）混合，在37℃保温10min。保温后，控制剪切力300s^-1，使用注射泵（Harvard Apparatus，Holliston,MA）沿胶原涂层表面灌流3min，检测抗血小板溶栓素对活体外灌注室内鼠全血中血小板粘附、聚集和血栓形成的作用。其中，未经抗血小板溶栓素处理的鼠全血灌流的实验为阴性对组照，经抗血小板溶栓素（6μg/mL）处理的鼠全血灌流的实验为活性药物组。采用Zeiss Axiovert135倒置荧光显微镜（60X-W物镜），实时记录鼠全血灌流过程中胶原上的血小板粘附、聚集和血栓形成。实验结果如图1～3所示。图1和图2中浅色部分示血小板聚集部分。 

试验结果显示，低剪切力流动条件下，经抗血小板溶栓素（6μg/mL）处理的鼠全血中血小板粘附和聚集少于阴性对照组，表明低剪切力（300s^-1）时，抗血小板溶栓素抑制活体外灌注室内鼠全血中血小板粘附、聚集和血栓形成。 

实施例2：抗血小板溶栓素对活体外灌注室内人全血中血小板粘附、聚集和血栓形成的作用 

取含有肝素抗凝（25U/mL）的人全血与荧光染料DiOC6（1μM）混合，在37℃保温10min。保温后，控制剪切力300s^-1，使用注射泵（Harvard Apparatus，Holliston,MA）沿胶原涂层表面灌流3min，检测抗血小板溶栓素对活体外灌注室内人全血中血小板粘附、聚集和血栓形成的作用。其中，未经抗血小板溶栓素处理的人全血灌流的实验为阴性对组照，经抗血小板溶栓素（6μg/mL）处理的人全血灌流的实验为活性药物组。采用Zeiss Axiovert135倒置荧光显微镜（60X-W物镜），实时记录人全血灌流过程中胶原上的血小板粘附、聚集和血栓形成。实验结果如图4～6所示。图4和图5中浅色部分示血小板聚集部分。 

试验结果显示，低剪切力流动条件下，经抗血小板溶栓素（6μg/mL）处理的人全血中血小板粘附和聚集少于阴性对照组，表明低剪切力（300s^-1）时，抗血小板溶栓素抑制活体外灌注室内人全血中血小板粘附、聚集和血栓形成。 

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。