法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2022-11-08
专利权的转移 IPC(主分类):G01N 1/02 专利号:ZL2013100720120 登记生效日:20221026 变更事项:专利权人 变更前权利人:南京林业大学 变更后权利人:江苏蕨美植物科技有限公司 变更事项:地址 变更前权利人:210037 江苏省南京市龙蟠路159号 变更后权利人:210000 江苏省南京市建邺区江心洲亚鹏路66号1号楼303-6室(江岛澎湃谷)
专利申请权、专利权的转移
2018-07-31
著录事项变更 IPC(主分类):G01N1/02 变更前: 变更后: 申请日:20130307
著录事项变更
2014-10-29
授权
授权
2013-06-19
实质审查的生效 IPC(主分类):G01N1/02 申请日:20130307
实质审查的生效
2013-05-22
公开
公开
技术领域
本发明涉及的是一种提取三叶鬼针草根系分泌物的方法,属于外来入侵物种防治技术领域。
背景技术
近几十年来,随着全球变化加剧以及我国对外贸易、旅游和交通的发展,外来植物入侵发生的频度和危害的程度都在迅速增加。这些入侵者严重威胁着生物多样性、经济和环境。我国每年由外来种入侵造成的经济损失超过 70 亿美元。
三叶鬼针草( Bidens pilosa L.) 又名一包针、一把针、婆婆针、盲肠草等,为菊科鬼针草属一年生草本植物,原产热带美洲,由于瘦果冠毛芒状具倒刺,可附着于人、物上远距离传播。该草生长速度极快,可以作为家兔饲料加以利用; 其味苦而无毒,具有清热解毒,活血散瘀消肿之功效,可以用于治疗痢疾、腹泻、感冒、炎症等。其有害的一面是入侵性非常强,对农田生产、果园、草坪、环境和生物多样性等造成严重的影响,已广泛分布于我国华东、华中、华南、中南、西南等地。
发明内容
本发明提出的是一种提取三叶鬼针草根系分泌物的方法,其目的是提升提取物含量,拓展对外来入侵物种的根系分泌物研究。
本发明的技术解决方案:一种提取三叶鬼针草根系分泌物的方法,包括如下步骤:
一、三叶鬼针草根系分泌物的收集装置设计;
二、三叶鬼针草根系分泌物的提纯方法。
本发明的优点:设计简单,时间较短,造价低廉,形成闭合循环系统可多次重复利用;提取根系分泌物含量高,充分利用植物根系的生长阶段;无破坏性,无污染;同时对于其他外来入侵物种的根系分泌物研究也有一定的借鉴意义。
附图说明
图1是三叶鬼针草根系分泌物收集流程示意图。
具体实施方式
实施例,提取三叶鬼针草根系分泌物的方法,包括如下步骤:
一、三叶鬼针草根系分泌物收集装置的设计;
二、三叶鬼针草根系分泌物的提纯方法。
所述的步骤一,三叶鬼针草根系分泌物收集装置的设计;具体包括如下步骤,
1、实验材料:
1)底部带Teflon塞的玻璃瓶规格10cm×15cm;蠕动泵(BT100-1L)连接管路均采用Teflon材料;树脂层析柱的规格为20mm×250mm; 树脂选用AB-8大孔中性吸附树脂;生长介质: 石英砂为白色,无其他杂色,石英砂粒径为0.5-1.0mm,玻璃珠粒径为10 mm,石英砂和玻璃珠的粒径比例为5∶1;
2)实验预培养15天龄的完整三叶鬼针草植株幼苗,茎高15cm,洗净营养土待用;
3)配置Hoagland’s原液5L,用去离子水稀释100倍为实验营养液,实验选用Hoagland’s配方pH=6.0,取各药品的质量浓度分别为:
硝酸钙浓度为945mg/L,硝酸钾浓度为506mg/L,硝酸铵浓度为80mg/L,磷酸二氢钾浓度为136mg/L,硫酸镁浓度为493mg/L,七水合硫酸亚铁浓度为3.45mg/L,乙二胺四乙酸二钠浓度为4.66mg/L;
2、装置预处理:
1)将带Teflon塞的玻璃瓶、玻璃树脂层析柱和Teflon材料的连接管路用0.5%质量的盐酸浸泡24h;取出用去离子水冲洗,然后用洁净超纯水润洗12h;放入烘箱烘干;分别将带Teflon塞的玻璃瓶和玻璃树脂层析柱用黑色不透明胶纸把瓶身包裹,使瓶壁和柱壁不透光;
2)石英砂和玻璃珠均用去离子水浸泡24h,放入烘箱烘干待用;
3)AB-8大孔中性吸附树脂,首先,用0.5倍于树脂柱体积的分析纯无水乙醇润洗,然后将润洗后的AB-8大孔中性吸附树脂浸泡于无水乙醇中24h;其次,用2倍体积的无水乙醇冲洗浸泡后的AB-8大孔中性吸附树脂,直至AB-8大孔中性吸附树脂不再流出白色浑浊物为止;再次,用4-6倍体积的重量浓度为5%HCl溶液冲洗AB-8大孔中性吸附树脂,浸泡2h后用去离子水洗至中性;再用2倍体积的重量浓度为2%NaOH溶液冲洗AB-8大孔中性吸附树脂,浸泡2h,最后用去离子水洗至中性;
3、装置组装:
1)将15天龄的三叶鬼针草幼苗取出40株,放入事先放入玻璃珠的带Teflon塞的玻璃瓶内,用处理过的石英砂固定并包埋,加入稀释100倍的Hoagland’s营养液250mL;
2)用2倍体积的稀释100倍的Hoagland’s营养液冲洗AB-8大孔中性吸附树脂,然后接在带Teflon塞的玻璃瓶下;
3)用Teflon材料的连接管路将AB-8大孔中性吸附树脂与带Teflon塞的玻璃瓶相互连接,形成回路;
4)接入BT100-1L型蠕动泵,设置流速为5mL/min,保持实际滴速为30滴/min,打开各个阀门,打开蠕动泵,营养液开始循环,闭合回路开始工作。
所述的步骤二、三叶鬼针草根系分泌物的提纯方法,具体如下步骤包括,
1)装置运行两天后,关闭阀门和蠕动泵,取下AB-8大孔中性吸附树脂;
2)每根AB-8大孔中性吸附树脂分别用分析纯甲醇溶液作为洗脱液,以2倍AB-8大孔中性吸附树脂体积的甲醇洗脱树脂;
3)平均每柱分析纯甲醇洗脱液为50mL,将洗脱液收集转移入心形瓶中;
4)将心形瓶接入BUCHI旋转蒸发仪(R210/R215)上,BUCHI旋转蒸发仪(R210/R215)设置的旋蒸气体为甲醇,恒定水温45℃,转速为BUCHI旋转蒸发仪(R210/R215)上标注的2档,系统压强200-220mbar;
5)旋转蒸发洗脱液至其不再减少时停止旋蒸,将旋蒸后的洗脱液转移入50mL离心管中,用去离子水冲洗心形瓶;
6)将50mL离心管密封,放入-70℃的低温冰箱中冷冻,约72h后取出;
7)将50mL离心管放入Christ ALPHA 1-2 LD plus冷冻干燥仪中,将固态水分全部抽出,得到粉末状的根系分泌物提取物;
实验得到根系分泌物的数据参考,每管为40个植株2天的根系分泌物收集量:
机译: 一种收集植物根系分泌物的方法
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