一种利用组织培养技术快速繁殖伊犁贝母的方法

摘要

本发明公开了一种利用组织培养技术快速繁殖伊犁贝母的方法，主要通过对外植体的选择与消毒处理、材料处理、愈伤组织的诱导、继代培养、生根培养以及炼苗移栽等步骤，使伊犁贝母的愈伤组织形成率达到了93%，增殖倍数达到了6倍，生根率达到了92%，最终的成活率达到了90%，并且伊犁贝母的质量和产量都得到很大的提高。并且本发明模拟野生伊犁贝母的生长环境，培养过程中温度较低，培养基质以黑钙土为主，在这种模拟野生环境中生长，质量和品质得到了提高。

说明书

技术领域

本发明涉及一种贝母的组织培养方法，尤其涉及一种适用于伊犁贝母的快速繁殖方法。

背景技术

伊犁贝母，属于新疆贝母的一种，主要分布于新疆哈巴河、阿勒泰、吉木乃、布尔津、尼勒克、特克斯、托里、温泉、博乐、霍城、巴音布克和巩乃斯等地区，生于海拔1500-2500米的山地草原甸中。伊犁贝母是一种喜湿润耐寒冷的植物，适宜在高原地区生长，这些地方，一方面气候凉爽，雨量较多，适宜贝母生长，另一方面，土地肥沃，多为山地粟钙士和黑钙土，种植后，数年不需要施肥。一般不宜在平原气温过高的地方种植，这种特殊的环境要求决定了伊犁贝母的繁殖量大大受到限制；伊犁贝母花色淡黄，并且含有生物碱、西贝素、雷的思宁等，味苦、性微寒，主治久喘气急、气管炎、淋巴结核、肺痈、咳嗽等症，具有清心润肺、止咳化痰的功能，是一种清热、润肺、止咳、化痰的常用药，具有重要经济价值。由于其特殊的功效，人们对其需求量也越来越多，所以对其进行大批量的繁殖具有很重要的意义。目前对贝母的组织培养技术的研究已经初具规模，但是对伊犁贝母的研究还不是很多，并且繁殖方法还没有成规模，没有形成一套完整的繁殖体系。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种利用组织培养技术繁殖伊犁贝母的方法。 

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是： 

一种利用组织培养技术快速繁殖伊犁贝母的方法，包括以下步骤：

（1）外植体的选择与消毒处理：首先选用生长健壮、成熟的新鲜的伊犁贝母鳞茎球，剥去鳞茎最外层干皱的鳞片和基部残余老根，流水冲洗30 min后放入清水中浸泡15min后，将鳞茎球一层一层的剥开，再在紫外灯下照射20 min，继而转入超净工作台，在超净工作台上先用70-75 %的乙醇浸泡15秒，然后用无菌水冲洗2-3次，再用6%次氯酸钠溶液消毒8min，无菌水冲洗2-3次。最后用0.1%的升汞溶液消毒12 min，无菌水冲洗4-5 次。

（2）材料的处理：将消毒处理好的鳞片用无菌滤纸吸干，在无菌条件下将材料按照上、中、下部还有基部分割开来，分别切成5-8mm的小块；

（3）愈伤组织的诱导：将经过步骤（2）处理好的鳞片切块接种到愈伤组织诱导培养基中，PH6.0，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2200lux，培养18-22天可见愈伤组织的形成，所述愈伤组织诱导培养基为MS+琼脂6.0g/L+2.4D1.5mg/L+6-BA 0.5mg/L+ ZT 0.2mg/L +蔗糖15g/L；

（4）继代培养：将步骤（3）中诱导的愈伤组织切下接种在继代培养基上，培养温度为24℃，光照周期12h/d，光强度为2300lux，PH6.0，所述的培养基为1/2MS+ 蔗糖35mg/L+6-BA1.0mg/L +NAA0.2 mg/L +KT0.5mg/L，经过5-8天时间分化出细芽后，升高培养温度到26℃，光照周期为14h/d，光强度为2600lux，继续培养7-12天便可分化出一簇一簇的小鳞茎；

（5）生根培养：将分化出来的小鳞茎一个个分别接种于下列诱导培养基中进行生根诱导： 3/4MS培养基+活性炭2.5mg/L+琼脂8g/L+IBA0.8mg/L，培养温度为22℃，光照周期12h/d，光强度为2200lux，PH值为6.0，经过22天左右根系长出5-10个根时，即开始下一个阶段；

（6）炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗6d，然后将长出新根的小鳞茎从培养瓶中取出，在阳光下晒1-2天，在晒的过程中要适当遮光，使光照强度为自然光的60%，然后将其移栽到由腐殖土、蛭石、珍珠岩、黑钙土的混合比例为1∶1∶1∶3的苗床上；当外界夜间温度在5-10℃，白天温度在15-20之间时把试管苗进行移栽，在移栽初期的3天内，用塑料薄膜覆盖，以保持湿度在80%以上，并且控制光照强度在2700-3200lx，之后逐渐揭去薄膜并适当增加光照，直至将移栽苗置于自然条件下。

 

本发明的有益效果是： 

（1）在在继代培养过程中当愈伤组织分化出细芽后，升高培养温度，提高光照周期和光照强度，这样缩短了培养时间。

（2）在移栽炼苗的过程中，苗床培养基质的配比恰当，幼苗生长健壮，枝叶茂盛，根系发达，并且在移栽的过程中采取必要的措施控制了生长的温度和光照强度，使伊犁贝母在适宜的温度下进行繁殖，提高了幼苗的质量和成活率，由于合理的移植，幼苗的成活率达到85%以上。 

（3）外植体利用率高，可以高达95%以上。

（4）本发明模拟野生伊犁贝母的生长环境，培养过程中温度较低，培养基质以黑钙土为主，这样在这种模拟野生环境中生长，质量和品质得到了提高。

具体实施方式

下面对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。

一种利用组织培养技术快速繁殖伊犁贝母的方法，包括以下步骤：

（1）外植体的选择与消毒处理：首先选用生长健壮、成熟的新鲜的伊犁贝母鳞茎球，剥去鳞茎最外层干皱的鳞片和基部残余老根，流水冲洗30 min后放入清水中浸泡15min后，将鳞茎球一层一层的剥开，再在紫外灯下照射20 min，继而转入超净工作台，在超净工作台上先用70%的乙醇浸泡15秒，然后用无菌水冲洗3次，再用6%次氯酸钠溶液消毒8min，无菌水冲洗3次。最后用0.1%的升汞溶液消毒12 min，无菌水冲洗5次。

（2）材料的处理：将消毒处理好的鳞片用无菌滤纸吸干，在无菌条件下将材料按照上、中、下部还有基部分割开来，分别切成6mm的小块；

（3）愈伤组织的诱导：将经过步骤（2）处理好的鳞片切块接种到愈伤组织诱导培养基中，PH6.0，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2200lux，培养22天可见愈伤组织的形成，所述愈伤组织诱导培养基为MS+琼脂6.0g/L+2.4D1.5mg/L+6-BA 0.5mg/L+ ZT 0.2mg/L +蔗糖15g/L；

（4）继代培养：将步骤（3）中诱导的愈伤组织切下接种在继代培养基上，培养温度为24℃，光照周期12h/d，光强度为2300lux，PH6.0，所述的培养基为1/2MS+ 蔗糖35mg/L+6-BA1.0mg/L +NAA0.2 mg/L +KT0.5mg/L，经过6天时间分化出细芽后，升高培养温度到26℃，光照周期为14h/d，光强度为2600lux，继续培养10天便可分化出一簇一簇的小鳞茎；

（5）生根培养：将分化出来的小鳞茎一个个分别接种于下列诱导培养基中进行生根诱导：3/4MS培养基+活性炭2.5mg/L+琼脂8g/L+IBA0.8mg/L，培养温度为22℃，光照周期12h/d，光强度为2200lux，PH值为6.0，经过22天左右根系长出5-10个根时，即开始下一个阶段；

（6）炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗6d，然后将长出新根的小鳞茎从培养瓶中取出，在阳光下晒2天，在晒的过程中要适当遮光，使光照强度为自然光的60%，然后将其移栽到由腐殖土、蛭石、珍珠岩、黑钙土的混合比例为1∶1∶1∶3的苗床上；当外界夜间温度在5-10℃，白天温度在15-20之间时把试管苗进行移栽，在移栽初期的3天内，用塑料薄膜覆盖，以保持湿度在80%以上，并且控制光照强度在3000lx，之后逐渐揭去薄膜并适当增加光照，直至将移栽苗置于自然条件下。

经过上述步骤的培养，伊犁贝母的愈伤组织形成率达到了93%，增殖倍数达到了6倍，生根率达到了92%，最终的成活率达到了90%，并且伊犁贝母的质量和产量都得到很大的提高。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。