一种检测猪生长性能杂种优势的方法及其应用

摘要

本发明公开了一种检测猪生长性能杂种优势的方法，包括如下步骤：(1)提取待测亲本猪的基因组DNA；(2)以待测亲本猪的基因组DNA为模板，以序列表中SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的DNA分子为引物对，进行PCR扩增，测定其PCR产物的测序；(3)检测亲本猪的基因型，通过选择杂交亲本猪之间的基因组合以规定其后代杂种猪的基因型；(4)确定基因型与猪杂种优势的相关性。本发明所述方法能通过简单的PCR扩增产物测序确定待测猪的基因型，从而选出能产生较大杂种优势的猪的亲本品系，方法简便易行，所用时间短，结果准确，精确度高。

说明书

技术领域

本发明涉及畜牧学和分子生物学领域，特别是涉及一种检测猪生长性能杂种优势的方法 及其应用。

背景技术

猪生长快慢是衡量养猪经济效益的重要指标，属于中等遗传力，受基因的非加性效应影 响较大，存在较高的杂种优势，猪业生产中常常利用杂种优势效应来提高生产效率。杂种优 势受到诸多因素影响，利用起来极其不便，对杂种优势的预测研究一直是个热点问题。目前， 杂种优势预测的方法主要有群体方差比较法、遗传距离预测法、线粒体混合试验法、蛋白质 多态性预测法以及分子标记法等等，其中采用分子生物学方法是最具应用前景的有效方法之 一，引来研究者的关注，但至今还没有获得实质性突破。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种可用于检测猪生长性能杂种优势的方法及其应用。

本发明提供了一种检测猪生长性能杂种优势的引物对，所述引物对的核苷酸序列如序列 表中SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。

本发明提供了一种检测猪生长性能杂种优势的方法，包括如下步骤：

(1)提取待测亲本猪的基因组DNA；

(2)以待测亲本猪的基因组DNA为模板，以序列表中SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所 示的DNA分子为引物对，进行PCR扩增，测定其PCR产物的测序；

(3)检测亲本猪的基因型，杂交后确定杂种猪的基因型

检测亲本猪PCR产物序列的第27、86和388三个特定位点的碱基组成，确定亲本猪的 基因型，两亲本杂交后，杂种猪的该三个位点的碱基排列形成CTTCGA、CTTCGG、CCTCGG 或CCTCGA基因型时，杂种猪分别为H1、H2、H3或H4猪；

(4)确定基因型与猪杂种优势的相关性

以两个亲本猪杂交获得H1猪具有较高生长性能杂种优势，不同基因型猪生长性能杂种 优势大小为H1＞H2＞H3＞H4。

本发明所述检测猪生长性能杂种优势的方法在猪的育种中的应用。

本发明所述检测猪生长性能杂种优势的方法，其中所述检测的三个特定位点连锁，前中 后分别相距为59bp和302bp，检测的方法为PCR产物测序。

本发明所述检测猪生长性能杂种优势的方法在猪的育种中的应用，包括如下步骤：采用 本发明所述的方法检测猪，分别获得亲本猪，以所述亲本猪为亲本进行杂交，获得具有较高 生长性能杂种优势的H1、H2、H3和H4猪，四种基因型的杂交猪都具有杂种优势。

本发明所述引物对在猪的育种中的应用。

本发明所述含有权利要求1所述引物对的试剂盒，其中包括本发明所述方法的引物对， 所述引物对如序列表中SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，所述试剂盒还包括常用的10×PCR 缓冲液、dNTPs、Taq DNA聚合酶、超纯水等。

本发明检测猪生长性能杂种优势的方法，与现有技术的不同之处在于，能通过简单的PCR 扩增产物测序确定待测猪的基因型，从而选出杂种优势较大的猪的亲本品系；本发明所述方 法只需检测一次，确定亲本的基因型，就可以确定其杂交后代是否具有杂种优势，省去了亲 本配合力反复测定的麻烦，省时省力；只需取得一部分组织(如表皮、耳组织、血液、毛发 等)测定待测猪的基因型就可以测定其基因型，在待测猪的任何发育时期都可以进行，还可 以早期选种和杂种优势预测；测定方法简便易行，所用时间短，结果准确，精确度高。

下面结合具体实施例对本发明所述检测猪生长性能杂种优势的方法作进一步说明。

具体实施方式

实施例

本发明所述检测猪生长性能杂种优势的方法，具体包括如下步骤：

一、提取待测亲本猪的基因组DNA

提取我国地方品种猪(淮猪)、引入品种猪(长白猪)基因组DNA。

二、位点基因型鉴定

以提取的基因组DNA为模板，以序列表中SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示DNA序 列为引物进行PCR扩增。

PCR扩增体系：总体系25μL，引物各1.0μL(10μM/L)，10×PCR缓冲液2.5μL，2mM/L dNTPs2.0μL，5U/μL Taq DNA聚合酶0.5μL，100ng/μL模板1.0μL，其余用超纯水补齐。

PCR扩增条件94℃预变性5min；94℃变性30s，63℃退火30s，72℃延伸45s，30个 循环，最后72℃延伸10min，4℃保存。

对PCR产物进行测序。

三、检测亲本猪的基因型并确定杂种猪的基因型

统计亲本基因型，4种基因型淮猪(母)分别与一种基因型的长白猪父本猪杂交，所述4 种基因型淮猪(母)的基因型分别为TTCCAA、CCCCGG、CCCCAA和TTCCGG，父本猪 基因型为CCTTGG，因此，得到的杂种猪基因型分别为CTTCGA、CTTCGG、CCTCGG和 CCTCGA，代号分别为H1、H2、H3和H4。

四、基因型与猪杂种优势的相关性

在每个杂交组合的后代中，选择8头仔猪参加生长性能测定试验，同时选择每种基因型 的双亲参加生长性能测定试验。杂交猪及父本猪测定体重为30～100kg，母本猪测定体重为 15-85kg，测定的生长性状为日增重。

测定条件：有所待测猪采用同一饲养标准，用本发明所述方法鉴定亲本猪的基因型，结 果见表1。

结果表明，不同基因型与杂交猪的杂种优势紧密相关，采用不同基因型母本猪与同一基 因型父本猪杂交后，得到的4种基因型的杂交猪的平均日增重都优于母本猪，杂种优势明显， 其中，H1型杂交猪的优势最明显，优势率为11.14％，H2次之，为8.25％，不同基因型猪生 长性能杂种优势大小为H1＞H2＞H3＞H4。

在实践中，培育具有较高生长性能杂种优势猪的方法，是用以本发明所述方法鉴定亲本 猪的基因型，以选出的合适亲本进行杂交，获得具有较高生长性能杂种优势的H1、H2、H3 和H4猪。其中，以基因型为TTCCAA的母本猪和基因型为CCTTGG父本猪培育H1型的杂 交猪，得到的杂交猪的杂种优势最大。

表1.不同基因型与猪杂种优势之关联性

纯种 基因型 平均日增重，g 杂种 基因型 代号 平均日增重，g 杂种优势率，％ 淮猪 TTCCAA 439.59±8.64 长淮杂 CTTCGA H1 723.61±7.22 11.14 淮猪 CCCCGG 446.64±6.18 长淮杂 CTTCGG H2 710.75±6.16 8.25 淮猪 CCCCAA 456.85±9.09 长淮杂 CCTCGG H3 702.89±10.72 7.38 淮猪 TTCCGG 450.56±5.00 长淮杂 CCTCGA H4 696.08±4.91 5.51 长白猪 CCTTGG 862.56±12.23          

以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行 限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的 各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。