一种促进中华绒螯蟹幼体发育的轮虫强化方法

摘要

本发明公布了一种用于中华绒螯蟹育苗中微量元素铜和锰强化轮虫的实用方法具体为：配置高度浓缩小球藻（湿重，2-8×10

说明书

技术领域

本发明涉及一种轮虫营养强化方法，特别是涉及一种促进中华绒螯蟹幼体发育的微量元素铜和锰强化轮虫的方法。

背景技术

人工繁育中华绒螯蟹幼体需要大量的活体饵料，人工培育的轮虫普遍作为虾蟹类幼体的活体饵料。在人工养殖过程中，发育阶段的开口饵料的营养平衡对后期的苗种产量起到关键作用。微量元素作为一些酶的辅基及金属结合位点，能够维持骨骼发育，促进机体免疫机能和保持物质代谢的正常进行。中华绒螯蟹幼体发育对饵料中铜和锰的含量要求分别为40 mg/kg、17 mg/kg，而人工培育的轮虫在没有额外的营养元素的补充下，铜和锰的含量仅为6 mg/kg、9 mg/kg，远低于中华绒螯蟹幼体的生长发育需求。中华绒螯蟹幼体在人工养殖环境下摄食的活体饵料种类有限，实践生产通常对活体饵料轮虫营养强化后投喂，但强化后微量元素的含量并未发生显著变化。

目前营养强化轮虫的方法有多种，其成本和效果也各有不同，给轮虫投喂单胞藻是较为常见的强化方式，已有的强化方法仅仅局限于在活体饵料轮虫中补充脂肪酸和维生素，往往忽略了外源微量元素的补充。铜和锰都是水溶性物质，轮虫不能够吸收水体中微量铜和锰。迄今，脂肪酸和维生素强化轮虫的方法不能直接应用到微量矿物元素，而水溶性微量元素的强化方法尚未建立。所以，寻找轮虫微量元素强化技术，以满足中华绒螯蟹幼体发育需求，成为亟需解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于中华绒螯蟹育苗中微量元素铜和锰强化轮虫的实用方法，使中华绒螯蟹幼体的活体饵料轮虫营养元素的比例达到平衡，以满足中华绒螯蟹幼体的生长发育的需求。

本发明所述的方法采用海水小球藻为富集微量元素载体，先用海水小球藻富集微量元素，再用其强化轮虫。

具体为：配置高度浓缩小球藻（湿重，2-8×10¹⁰ cells g^?1），加入浓度为1000-2000 mg/L硫酸铜和浓度为500-1000 mg/L硫酸锰溶液，使得Cu的总量为400-800 ug/g海水小球藻溶液、Mn的总量为150-300ug/g海水小球藻溶液，富集3-6 h，将经过富集后的海水小球藻用于强化轮虫10-12 h，小球藻与轮虫的量比5×10³ cells/ ind。

上述方法中所用的铜可为五水硫酸铜分析纯试剂，锰可为分析纯硫酸锰试剂。经过上述方法强化后的轮虫中Cu和Mn的含量分别可达到40-60 mg/kg、15-25 mg/kg，可满足中华绒螯蟹幼体的生长发育的需求，且不会产生毒性反应。

上述方法中，小球藻富集铜、锰的过程可同时进行，也可分别依次进行，如先富集铜再富集锰，或先富集锰再富集铜。

进一步地，可用经过上述方法富集了铜和锰的小球藻、脂肪酸和维生素同时强化轮虫，使轮虫体内营养物质比例平衡。

用本发明的方法强化的轮虫喂养中华绒螯蟹幼体，有效地补充了微量元素铜和锰，可以促进其变态发育，使其比自然状态下提前变态到大眼幼体，提高人工繁育中华绒螯蟹大眼幼体的产量和质量。

附图说明

图1为实施例3中轮虫体内铜锰含量随强化时间的变化曲线图；

图2为实施例3中轮虫体内n-3 HUPA含量随强化时间的变化曲线图；

图3为幼体发育指数柱状比较图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进一步说明，但不构成对本发明的限制。

实施例1  轮虫直接吸收微量元素铜和锰

试验采用容积为30L的水槽，装入25 L盐度为20‰的海水，水槽设置添加铜浓度为50 μg L^?1，锰的浓度为50 ug L^-1，设置不添加铜、锰的对照组，用150目筛绢将培养的轮虫浓缩成高密度轮虫液，然后取1mL稀释计数，调整至密度为每毫升800个，以浓度为每毫升4×10⁶ 小球藻细胞投喂轮虫来维持其正常生理状态。12小时后测定轮虫体内铜和锰的浓度分别为6.48±0.2和9.50±0.2 μg g^?1（干物质），与对照组相比没有明显变化。

实施例2  海水小球藻富集微量元素铜和锰

海水小球藻均在指数生长期收获，经LXJ-H型离心机离心浓缩，保存于冰箱中（不超过24小时）。用轮虫培养液加入适量藻泥，配置高度浓缩小球藻（湿重，7×10¹⁰ cells /g）；用去离子水配置成浓度分别为1000mg/L、1500mg、2000 mg/L硫酸铜溶液和500mg/L、750mg/L、1000 mg/L硫酸锰溶液。取8只塑料试管编号为1-8，各加入10 g小球藻溶液，1-4号试管中分别依次加入4mL浓度为 0mg/L、1000mg/L、1500mg、2000 mg/L硫酸铜溶液，再分别依次加入3mL 浓度为0mg/L、500mg/L、750mg/L、1000 mg/L硫酸锰溶液，将试管放置于23℃下，使1-4号试管中小球藻富集微量元素铜和锰3小时。将富集结束后的小球藻溶液720g离心20min，去掉溶液，收集小球藻检测其中微量元素铜和锰的含量，结果如下：

实施例3 轮虫强化

以实施例2中富集过微量元素铜和锰的3号小球藻试管和2 mg/L乳化型鱼油强化体长为200-300 um的褶皱臂尾轮虫（Bracgionus plicatilis），25L小球藻与轮虫的量比5×10³ cells/ ind（加入50 mg乳化型鱼油），使其体内含有适宜微量元素和不饱和脂肪酸。分别于1、3、6、12、24小时取样，根据GB/T5009. 168-2003和GB/T5009.17- 2003检测营养强化后的轮虫体内脂肪酸含量和微量元素含量，结果如图1、2所示。由图中可知，轮虫体内主要n-3高级不饱和脂肪酸（high unsaturated fatty acid ，HUPA）和微量元素铜和锰的含量明显上升，在强化时间为12h时，基本达到河蟹幼体对轮虫体内微量元素铜和锰及脂肪酸的营养需求，强化时间过长会导致工厂化育苗的成本增加。

实施例4 微量元素铜和锰强化的轮虫对中华绒鳌蟹幼体发育的影响

在工厂化育苗中，将轮虫按如实施例3所述的方法强化后，对1期蚤状幼体每天投喂轮虫15个/L，2期蚤状幼体每天投喂轮虫20个/L，共投喂8天，以投喂未经强化的轮虫为对照。如图3所示，幼体的发育状况表明，与对照组相比，铜和锰强化轮虫对幼体的发育指数有显著的促进作用，能够促进大眼幼体的蜕皮变态，进而减小河蟹幼体自残现象的发生。