一种高山羊齿的繁育方法

摘要

本发明公开一种高山羊齿的繁育方法，该方法提供诱导增殖培养基、生根培养基，同步进行芽诱导和增殖培养，炼苗后直接移植至育苗袋培养。本发明方法提出了高山羊齿种苗生产技术流程中关键环节的技术方案，繁殖速度快，一个周期25～30天繁殖倍数可达5～7倍；生根培养20天左右，每株植株即可长出5～8条根，其苗健壮，根系发达，简化了组培程序，大大节约了成本和生产时间，适宜标准化、工厂化规模化生产。

说明书

技术领域

本发明属于花卉栽培技术领域，特别涉及蕨类植物繁殖技术领域。

背景技术

高山羊齿(Davallia mariesii)是骨碎补科骨碎补属的蕨类植 物。原产危地马拉,于90年代作为切叶进入中国。是一种适合用作 切叶的蕨类植物，目前大量应用于插花，其千姿百态的叶形、叶姿和 青翠碧绿的色彩，使人赏心悦目。随着室内观赏植物的发展，其产品供 应一直处于紧缺的状况。高山羊齿繁殖方法主要是分株繁殖和孢子繁 殖，但分株繁殖数量少，易损坏株型，恢复很慢且受季节限制，不能在 短期内获得大量种苗；孢子繁殖由于自然环境中孢子成苗率很低，影响 了繁殖速度，同时这些方法用量大，还受到季节的限制，难以进行规模 化、标准化生产和大面积的推广。因此探索一个快速有效的高山羊齿的 繁育方法势在必行。而组培技术具有繁殖速度快、繁殖系数大、繁殖后 代整齐一致、可周年进行生产等优点，因此利用组培技术进行高山羊齿 的繁殖，能在短期内培育出大量种苗，目前，还没有对高山羊齿进行组 培繁育的报道。

发明内容

本发明的目的是克服现有高山羊齿种苗繁殖技术存在材料要求高、 用量大、难以规模化生产等缺陷和不足，提供一种能适宜高山羊齿工厂 化组培快繁的方法及专用培养基，以满足高山羊齿优质种苗的大规模生 产需要。

本发明提供的一种高山羊齿繁育的专用培养基，由以下两个培养基 组成：

（1）诱导增殖培养基：

MS基本培养液

（2）生根培养基：

1/2MS基本培养液

所述的高山羊齿繁育的专用培养基还可以由以下两个培养基组成：

（1）诱导增殖培养基：

MS基本培养液

（2）生根培养基：

1/2MS基本培养液

本发明所提供的一种高山羊齿的繁育方法，包括以下步骤：

(1)取成熟期的高山羊齿孢子用纱布包好后，在超净环境下用质量 分数为75%的酒精浸泡30-40s后，依次放入质量分数为0.1%的氯化汞 溶液中消毒6min，次氯酸钠混合液中消毒10min，再用无菌水冲洗4～5 次，每次2min，即获得高山羊齿无菌孢子，所述的次氯酸钠混合液是由 次氯酸钠溶液加入吐温20混合而成，次氯酸钠溶液与吐温20的配比是： 质量分数为2%的次氯酸钠溶液100ml中加入2滴吐温20；

(2)诱导和增殖培养：将步骤(1)获得的高山羊齿无菌孢子接入盛有 下列诱导增殖培养基的培养瓶中：

MS基本培养液

在温度为25℃±2℃条件下暗培养15d～16d，转到光照强度为1500 lx～2000lx，温度为25℃±2℃，光照时间为8～10h/d的条件下，继续 培养至高山羊齿孢子萌发分化出绿色球状体，将绿色球状体切开；

(3)继代培养：将步骤(2)切开的绿色球状体转接到盛有与步骤(2) 所述的诱导增殖培养基配方相同的新的诱导增殖培养基的培养瓶中，在 光照强度为1500lx～2000lx，温度为25℃±2℃，光照时间为8～10h/d 的条件下，继代培养25～30d后，再转接到盛有与步骤(2)所述的诱导 增殖培养基配方相同的新的诱导增殖培养基的培养瓶中，并在与继代培 养所述的相同的培养条件下继代培养25～30d，如此反复，待增殖基数 达到所需的数量时，将培养出的苗转入步骤（4）培养；未成苗的绿色 球状体转接到盛有与步骤(2)所述的诱导增殖培养基配方相同的新的诱 导增殖培养基的培养瓶中，并在与继代培养所述的相同的培养条件下继 续培养，待成苗后，将培养出的苗转入步骤（4）培养；

（4）生根培养基：将步骤（3）获得的苗接种到盛有下列生根培养 基的培养瓶中：

1/2MS基本培养液

在光照强度为1500lx～2000lx，温度为25℃±2℃，光照时间为10～ 12h/d的条件下培养至植株基部长出根；

（5）将步骤（4）植株已长有根的培养瓶置于大棚内进行常规炼苗3～ 5d，再将培养瓶内的苗取出，按常规洗净苗上的培养基，放入质量分数 为0.1～0.2%的多菌灵溶液中消毒1～2min后，移栽至装有下列基质的 育苗袋中，所述基质由泥炭、腐质土、珍珠岩和蛭石混合而成，泥炭、 腐质土、珍珠岩和蛭石的质量比为：泥炭：腐质土：珍珠岩：蛭石 =7:3:1:0.5，在常规浇水和施肥管理条件下，生长40d后，即得高山羊 齿移栽苗。

所述的高山羊齿的繁育方法，还可以在步骤（2）、步骤(3)和步骤 （4）按以下方法进行：

步骤（2）诱导和增殖培养是将步骤(1)获得的高山羊齿无菌孢子接 入盛有下列诱导增殖培养基的培养瓶中：

MS基本培养液

在温度为25℃条件下暗培养16d，转到光照强度为1800lx，温度 为25℃，光照时间为9h/d的条件下，继续培养至高山羊齿孢子萌发分 化出绿色球状体，将绿色球状体切开；

步骤(3)继代培养的条件是光照强度为1800lx，温度为25℃，光照 时间为9h/d，继代培养27d。

步骤（4）生根培养基是将步骤（3）获得的苗接种到盛有下列生根 培养基的培养瓶中：

1/2MS基本培养液

在光照强度为1800lx，温度为25℃，光照时间为11h/d的条件下 培养至植株基部长出根。

本发明具有下列优点和效果：

1、本发明所述的高山羊齿繁育的专用培养基和高山羊齿的繁育方 法，配置了特别适宜高山羊齿的组培繁育的专用培养基和培养条件及方 法，采用该专用培养基及方法繁殖速度快，25～30天为一个周期，一个 周期繁殖倍数可达5～7倍；生根培养20天左右，每株植株即可生长出 5～8条根，其苗健壮，根系发达，利于出瓶后生长。

2、本发明首次提出了对整个高山羊齿种苗生产技术流程中关键环 节的技术方案，同步进行芽诱导和增殖培养，继代培养基与芽诱导和增 殖培养基相同，培养条件基本相同，既达到了好的效果又简化了组培技 术的培养程序，大大节约了成本和生产时间，还解决了常规繁育体系生 产的种苗亲本来源复杂，种苗质量不稳定的难题，本发明方法，能使种 苗性状稳定，种苗来源单一，适宜标准化、工厂化规模化生产，为市场 提供了统一标准的优良种苗。

3、本发明方法生产的无菌生根苗直接移栽进入育苗袋中管理，省 去了组培苗营养钵移栽的环节，移栽成活的种苗便于运输，移栽苗适应 性强，摘去育苗袋后即可直接栽种。

4、本发明繁育方法在培养室内即可实现周年生产，既节约了土地 资源，又提高了经济效益，克服了高山羊齿种苗无法周年进行生产的难 点。

具体实施方式

实施例1

（1）取成熟期的高山羊齿孢子，用纱布包好后，在超净环境下用质 量分数为75%的酒精浸泡30s后，依次放入质量分数为0.1%的氯化汞溶 液中消毒6min，次氯酸钠混合液中消毒10min，再用无菌水冲洗4～5 次，每次2min，即获得高山羊齿无菌孢子，所述的次氯酸钠混合液是由 次氯酸钠溶液加入吐温20混合而成，次氯酸钠溶液与吐温20的配比是： 质量分数为2%的次氯酸钠溶液100ml中加入2滴吐温20。

(2)诱导和增殖培养：将步骤(1)获得的高山羊齿无菌孢子接入盛有 下列诱导增殖培养基的培养瓶中：

MS基本培养液

在温度为23℃条件下暗培养15d，转到光照强度为2000lx，温度为 23℃，光照时间为8h/d的条件下，继续培养至高山羊齿孢子萌发分化 出绿色球状体，将绿色球状体切开。

（3）继代培养：将步骤(2)切开的绿色球状体转接到盛有与步骤(2) 所述的诱导增殖培养基配方相同的新的诱导增殖培养基的培养瓶中，在 光照强度为2000lx，温度为23℃，光照时间为8h/d的条件下，继代培 养25d后，再转接到盛有与步骤(2)所述的诱导增殖培养基配方相同的 新的诱导增殖培养基的培养瓶中，并在与继代培养所述的相同的培养条 件下继代培养，即：在光照强度为2000lx，温度为23℃，光照时间为 8h/d的条件下，继代培养25d，如此反复，待增殖基数达到所需的数量 时，将培养出的苗转入步骤（4）培养。继代培养的次数可以根据需要 的组培苗的数量而定，可以只继代培养一次，也可以继代培养2次以上。

未成苗的绿色球状体转接到盛有与步骤（2）所述的诱导增殖培养 基配方相同的新的诱导增殖培养基的培养瓶中，并在与继代培养所述的 相同的培养条件下继代培养，即：在光照强度为2000lx，温度为23℃， 光照时间为8h/d的条件下继续培养，待成苗后，将培养出的苗后转入 步骤（4）培养。

（4）生根培养基：将步骤（3）获得的苗接种到盛有下列生根培养 基的培养瓶中：

1/2MS基本培养液

在光照强度为2000lx，温度为23℃，光照时间为10h/d的条件下培 养至植株基部长出根；

（5）将步骤（4）植株已长有根的培养瓶置于大棚内散射光下进行 常规炼苗3d，再将培养瓶内的苗取出，按常规洗净苗上的培养基，放入 质量分数为0.1%的多菌灵溶液中消毒1～2min后，移栽至装有基质的育 苗袋中，并将该育苗袋置于透光率为30%的遮阳网下培育、生长期每天 浇水至基质湿润并进行叶面喷水至叶面滴水，冬季休眠期3天浇一次水 至基质湿润；苗移栽至育苗袋中生长10-12d后施质量分数为1％的复合 肥2次，每次施肥将基质浇透，2次施肥间隔10d，生长40d，即得高山 羊齿移栽苗；所述基质由泥炭、腐质土、珍珠岩和蛭石混合而成，泥炭、 腐质土、珍珠岩和蛭石的质量比为：泥炭：腐质土：珍珠岩：蛭石 =7:3:1:0.5；所述的复合肥中N、P₂O₅、K₂O的质量比为：N：P₂O₅：K₂O=20： 10：10。

实施例2

实施例2除以下措施不同外其余措施与实施例1相同，不再赘述。 (1)取成熟期的高山羊齿孢子用纱布包好后，在超净环境下用质量分数 为75%的酒精浸泡35s。

(2)诱导和增殖培养的诱导增殖培养基为：

MS基本培养液

在温度为25℃条件下暗培养16d，转到光照强度为1800lx，温度为 25℃，光照时间为9h/d的条件下，继续培养至高山羊齿孢子萌发分化 出绿色球状体，将绿色球状体切开。

(3)继代培养：每次继代培养28d，供继代培养了3次，继代培养的条件 为：光照强度为1800lx，温度为25℃，光照时间为9h/d，继代培养27d， 继代培养的培养基与步骤(2)所述的诱导增殖培养基配方相同。

（4）生根培养基为：

1/2MS基本培养液

在光照强度为1800lx,温度为25℃，光照时间为11h/d的条件下培 养至植株基部长出根；

（5）培养瓶置于大棚内进行常规炼苗4d，再将培养瓶内的苗取出，洗 净苗上的培养基后放入质量分数为0.2%的多菌灵溶液中消毒2min后， 移栽至育苗袋中培育。

实施例3

实施例3除以下措施不同外其余措施与实施例1相同，不再赘述。

(1)取成熟期的高山羊齿孢子用纱布包好后，在超净环境下用质量分数 为75%的酒精浸泡40s。

(2)诱导增殖培养基为：

MS基本培养液

在温度为27℃条件下暗培养15d，转到光照强度为1500lx，温度为 27℃，光照时间为10h/d的条件下，继续培养至高山羊齿孢子萌发分化 出绿色球状体，将绿色球状体切开。

（3）继代培养：每次继代培养30d，共继代培养了5次，继代培养条件 为：光照强度为1500lx，温度为27℃，光照时间为10h/d，继代培养 30d，继代培养的培养基与步骤(2)所述的诱导增殖培养基配方相同。

（4）生根培养基为：

1/2MS基本培养液

在光照强度为1500lx，温度为27℃，光照时间为12h/d的条件下培养至植株基部长出根；

（5）培养瓶置于大棚内进行常规炼苗5d，再将培养瓶内的苗取出，洗 净苗上的培养基后放入质量分数为0.2%的多菌灵溶液中消毒1.5min后， 移栽至育苗袋中培育。

以上各实施例繁殖速度快，25～30天为一个繁殖周期，一个周期繁殖 倍数可达5～7倍；生根培养20天左右，每株植株即可生长出5～8条 根，其苗健壮，根系发达，利于出瓶后生长。