用玉米素核苷测定不同茬高多花黑麦草再生能力的方法

摘要

本发明涉及一种用玉米素核苷测定不同茬高多花黑麦草再生能力的方法，培植不同茬高多花黑麦草，用酶联免疫法测量新生叶片中玉米素核苷，通过比较新生叶片中玉米素核苷含量，含量大者说明其再生能力更强。本发明能有效测定不同茬高多花黑麦草再生能力的强弱，对研究牧草的再生具有重要的意义；本发明的测量方法简单，易于操作，便于广泛应用，并且实用性强。

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定方法，具体的说是一种用玉米素核苷测定不同茬高多花黑麦草再生能力的方法。

背景技术

牧草被草食动物采食或人为剪割后，常常表现出“再生性”， 这是牧草维持自身生存，抵御草食动物伤害的最基本的生物学特性之一，其对维持草场生产、提高产草量也都有重要的意义，牧草去叶后所留的不同茬高，会对牧草的再生产生重要的影响。

不同的茬高会造成的地上部分贮存的有机物质的不同，从而会对牧草的再生产生不同的影响。因为牧草再长的本质问题是一个利用能量和物质来制造新生有机物质的过程，然而，牧草去叶不但会严重抑制其光合作用，减少光合产物的供应，甚至在去叶严重的情况下，会导致光合作用完全中断，所以，由于去叶后所留茬高差别所造成的体内贮存的有机产物量的差别，有可能会对其再生产生非常重要的影响。

有效排除由茬高所引起的体内贮存的有机产物量的差别对再生的影响，才能从本质上反映不同茬高黑麦草的再生能力的强弱，但如何有效地检测到，这种排除茬高所造成的体内贮存的有机产物量的差别对再生的影响后，不同茬高多花黑麦草再生能力的强弱，至今未见报道。寻找一种有效的方法，来检测不同茬高多花黑麦草，由非茬高因素所诱导的再生能力的强弱，对研究牧草的再生具有重要的意义，然而至今还未见关于这方面具体测量方法的报道。

发明内容

本发明针对上述问题的不足，提供用玉米素核苷测定不同茬高多花黑麦草再生能力的方法。

本发明为解决上述问题所采用的技术方案是：

一种用玉米素核苷测定不同茬高多花黑麦草再生能力的方法，包括以下步骤：

步骤一：选取生长一致的2周龄多花黑麦草108株，以每盆6株植入18个相同的花盆内，花盆内装有混合基质，按重量份数比混合基质由3份蛭石和1份草炭土组成，在平均温度为25℃，每天平均光照为8小时条件下，培养70天后，将这18盆多花黑麦草随机分为2组，每组9盆，即试验组a和试验组b，再把试验组a和试验组b分别随机分为a1、a2、a3亚组和b1、b2、b3亚组，每亚组3盆；剪去试验组a和试验组b中的多花黑麦草叶片，a组和b组分别留不同茬高；

直接取试验亚组a1和b1，或者将试验组a和b中已剪去叶的多花黑麦草继续培养并剪叶后取试验亚组a1和b1，培养和剪叶方法为日均温度20℃条件下培养，每隔6天剪掉叶片一次，连续剪叶N次，a组和b组每次剪过之后分别与之前留相同茬高；

将剪叶后的试验亚组a1和b1的根与茬分离，得到多花黑麦草茬，将多花黑麦草茬放入75℃的烘干箱内，烘干，得到每盆多花黑麦草茬烘干物，然后用电子天平测每盆多花黑麦草茬烘干物质量，分别得到试验亚组a1和试验亚组b1的茬生物量Ra和Rb，备用；

步骤二：将试验亚组a2、a3和b2、b3中多花黑麦草在温度为20-25℃条件下培养，6天后，在步骤一所留茬高的位置上剪掉新生的多花黑麦草叶片，得到多花黑麦草新生叶，将试验亚组a2和b2中的多花黑麦草新生叶送入75℃的烘干箱内，烘干，得到每盆多花黑麦草新生叶烘干物，然后用电子天平测每盆多花黑麦草新生叶烘干物质量，分别得到试验亚组a2和b2新生叶生物量La和Lb，备用；

步骤三：利用测得的多花黑麦草茬生物量Ra、Rb，新生叶生物量La、Lb，根据公式RIa =                                                ×100%和RIb = ×100%计算多花黑麦草再生能力指数RIa和RIb的大小，备用；

步骤四：用酶联免疫法测量步骤二中的试验亚组a3和b3新生叶片的玉米素核苷含量，得到试验亚组a3和b3新生叶玉米素核苷含量Za和Zb，备用；

步骤五：比较RIa和RIb的大小或Za和Zb的大小，值较大者就说明该组黑麦草的再生能力较强。如果当RIa大于RIb时，Za大于Zb；当RIa小于RIb时，Za小于Zb，则说明用玉米素核苷测定不同茬高多花黑麦草再生能力的方法为有效方法。

本发明的有益效果为：

a、本发明能有效测定不同茬高多花黑麦草再生能力的强弱，对研究牧草的再生具有重要的意义；

b、本发明的测量方法简单，易于操作，便于广泛应用，并且实用性强；

c、本发明所需仪器简单，成本低廉，提高了经济效益。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明做进一步的阐述。

一种用玉米素核苷测定不同茬高多花黑麦草再生能力的方法，包括以下步骤：

步骤一：选取生长一致的2周龄多花黑麦草108株，以每盆6株植入18个相同的花盆内，花盆内装有混合基质，按重量份数比混合基质由3份蛭石和1份草炭土组成，在平均温度为25℃，每天平均光照为8小时条件下，培养70天后，将这18盆多花黑麦草随机分为2组，每组9盆，即试验组a和试验组b，再把试验组a和试验组b分别随机分为a1、a2、a3亚组和b1、b2、b3亚组，每亚组3盆；剪去试验组a和试验组b中的多花黑麦草叶片，a组和b组分别留不同茬高；

直接取试验亚组a1和b1，或者将试验组a和b中已剪去叶的多花黑麦草继续培养并剪叶后取试验亚组a1和b1，培养和剪叶方法为日均温度20℃条件下培养，每隔6天剪掉叶片一次，连续剪叶N次，a组和b组每次剪过之后分别与之前留相同茬高；

将剪叶后的试验亚组a1和b1的根与茬分离，得到多花黑麦草茬，将多花黑麦草茬放入75℃的烘干箱内，烘干，得到每盆多花黑麦草茬烘干物，然后用电子天平测每盆多花黑麦草茬烘干物质量，分别得到试验亚组a1和试验亚组b1的茬生物量Ra和Rb，备用；

步骤二：将试验亚组a2、a3和b2、b3中多花黑麦草在温度为20-25℃条件下培养，6天后，在步骤一所留茬高的位置上剪掉新生的多花黑麦草叶片，得到多花黑麦草新生叶，将试验亚组a2和b2中的多花黑麦草新生叶送入75℃的烘干箱内，烘干，得到每盆多花黑麦草新生叶烘干物，然后用电子天平测每盆多花黑麦草新生叶烘干物质量，分别得到试验亚组a2和b2新生叶生物量La和Lb，备用；

步骤三：利用测得的多花黑麦草茬生物量Ra、Rb，新生叶生物量La、Lb，根据公式RIa = ×100%和RIb = ×100%计算多花黑麦草再生能力指数RIa和RIb的大小，备用；

步骤四：用酶联免疫法测量步骤二中的试验亚组a3和b3新生叶片的玉米素核苷含量，得到试验亚组a3和b3新生叶玉米素核苷含量Za和Zb，备用；

步骤五：比较RIa和RIb的大小或Za和Zb的大小，值较大者就说明该组黑麦草的再生能力较强。如果当RIa大于RIb时，Za大于Zb；当RIa小于RIb时，Za小于Zb，则说明用玉米素核苷测定不同茬高多花黑麦草再生能力的方法为有效方法。

实施例1

一种用玉米素核苷测定不同茬高多花黑麦草再生能力的方法，包括以下步骤：

步骤一：选取生长一致的2周龄多花黑麦草108株，以每盆6株植入18个相同的花盆内，花盆内装有混合基质，按重量份数比混合基质由3份蛭石和1份草炭土组成，在平均温度为25℃，每天平均光照为8小时条件下，培养70天后，将这18盆多花黑麦草随机分为2组，每组9盆，即试验组a和试验组b，再把试验组a和试验组b分为随机分为a1、a2、a3亚组，和b1、b2、b3亚组，每亚组3盆；剪去试验组a和试验组b中的多花黑麦草叶片，试验组a和试验组b分别留1cm和5cm的茬高，记为剪叶第1次，在第1次剪叶后立即取试验亚组a1和b1，将根与茬分离，得到多花黑麦草茬。将多花黑麦草茬送入75℃的烘干箱内，烘干，得到每盆多花黑麦草茬烘干物，然后用电子天平测每盆多花黑麦草茬烘干物质量，分别得到试验亚组a1和试验亚组b1的茬生物量Ra和Rb，备用；

步骤二：将试验亚组a2、a3和b2、b3中多花黑麦草在温度为25℃条件下培养，6天后，在步骤一所留茬高的位置上剪掉新生的多花黑麦草叶片，得到多花黑麦草新生叶，将试验亚组a2和b2中的多花黑麦草新生叶送入75℃的烘干箱内，烘干，得到每盆多花黑麦草新生叶烘干物，然后用电子天平测每盆多花黑麦草新生叶烘干物质量，分别得到试验亚组a2和b2新生叶生物量La和Lb，备用；

步骤三：利用测得的多花黑麦草茬生物量Ra、Rb，新生叶生物量La、Lb，根据公式RIa = ×100%和RIb = ×100%计算多花黑麦草再生能力指数RIa和RIb的大小，备用；

步骤四：用酶联免疫法测量步骤二中的试验亚组a3和b3新生叶片的玉米素核苷含量，得到试验亚组a3和b3新生叶玉米素核苷含量Za和Zb，备用；

步骤五：比较RIa和RIb的大小，Za和Zb的大小。值较大者就说明该组黑麦草的再生能力较强。如果当RIa大于RIb时， Za大于Zb；而当RIa小于RIb时，Za小于Zb，则说明可用再生叶中玉米素核苷含量的高低来间接反映黑麦草再生能力的强弱；

结果表明：RIa为81.30%，RIb为70.19%，Za为234.51ng/g，Zb为150.21 ng/g；RIa比RIb高15.82%，说明在1次去叶的情况下，留有茬高为1cm的多花黑麦草比留茬高为5cm的多花黑麦草具有更强的再生能力；Za比Zb高56.1%，证明在1次去叶的情况下，用玉米素核苷测定不同茬高多花黑麦草再生能力的方法为有效方法。

实施例2

用玉米素核苷测定不同茬高多花黑麦草再生能力的方法，包括以下步骤：

步骤一：选取生长一致的2周龄多花黑麦草108株，以每盆6株植入18个相同的花盆内，花盆内装有混合基质，按重量份数比混合基质由3份蛭石和1份草炭土组成，在平均温度为25℃，每天平均光照为8小时条件下，培养70天后，将这18盆多花黑麦草随机分为2组，每组9盆，即试验组a和试验组b，再把试验组a和试验组b分为随机分为a1、a2、a3亚组，和b1、b2、b3亚组，每亚组3盆；剪去试验组a和试验组b中的多花黑麦草叶片，试验组a和试验组b分别留1cm和5cm的茬高，将试验组a和b中已剪去叶的、且留茬高分别为1cm和5cm的多花黑麦草在日均温度为20℃条件下培养，每隔6天剪掉叶片一次，连续剪叶2次，a组和b组所留茬高同样分别为1cm和5cm，记为剪叶第3次，，在第3次剪叶后立即取试验亚组a1和b1，将根与茬分离，得到多花黑麦草茬。将多花黑麦草茬送入75℃的烘干箱内，烘干，得到每盆多花黑麦草茬烘干物，然后用电子天平测茬烘干物质量，分别得到试验亚组a1和试验亚组b1的茬生物量Ra和Rb，备用；

步骤二：将试验亚组a2、a3和b2、b3中多花黑麦草在温度为25℃条件下培养，6天后，在步骤一所留茬高的位置上剪掉新生的多花黑麦草叶片，得到多花黑麦草新生叶，将试验亚组a2和b2中的多花黑麦草新生叶送入75℃的烘干箱内，烘干，得到每盆多花黑麦草新生叶烘干物，然后用电子天平测新生叶烘干物质量，分别得到试验亚组a2和b2新生叶生物量La和Lb，备用；

步骤三：利用测得的多花黑麦草茬生物量Ra、Rb，新生叶生物量La、Lb，根据公式RIa = ×100%和RIb = ×100%计算多花黑麦草再生能力指数RIa和RIb的大小，备用；

步骤四：用酶联免疫法测量步骤二中的试验亚组a3和b3新生叶片的玉米素核苷含量，得到试验亚组a3和b3新生叶玉米素核苷含量Za和Zb，备用；

步骤五：比较RIa和RIb的大小，Za和Zb的大小。值较大者就说明该组黑麦草的再生能力较强。如果当RIa大于RIb时，Za大于Zb；而当RIa小于RIb时，Za小于Zb，则说明可用再生叶中玉米素核苷含量的高低来间接反映黑麦草再生能力的强弱；

结果表明，RIa为20.59%，RIb为37.51%，Za为83.96ng/g，Zb为33.90 ng/g；RIb比RIa高82.18%，说明在3次去叶的情况下，留有茬高为5cm的多花黑麦草比留茬高为1cm的多花黑麦草具有更强的再生能力；Za比Zb高147.7%，证明在3次去叶的情况下，用玉米素核苷测定不同茬高多花黑麦草再生能力的方法为有效方法。