利用低温蛋白酶促进细菌生长的方法

摘要

本发明涉及一种利用低温蛋白酶促进细菌生长的方法，属于分子生物学与生物技术领域。所述方法为将低温蛋白酶加入到配置好的LB培养基中，添加量为培养基体积的1‑5％(g/L)，室温下反应半小时后高温灭菌，按常规操作进行细菌接种培养。所述方法能够促进细菌生长，缩短生长周期，解决细菌培养初期生长缓慢这一问题。

说明书

技术领域

本发明涉及一种低温蛋白酶的应用，尤其涉及一种利用低温蛋白酶促进细菌生长的方法，属于分子生物学与生物技术领域。

背景技术

LB培养基是一种培养基的名称，含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种，使菌种成倍扩增，达到使用要求。也可用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)。可分为液体培养基和固体培养基。

细菌培养是借助人工配置的培养基和人为创造培养条件，将少量细菌接种到培养基中，让微生物在适宜的条件下，不断从周围环境中吸收营养物质，通过酶的作用转化为细胞物质的组分和结构，使某些微生物快速生长繁殖。一般细菌可在有氧条件下，37℃中放18～24小时生长。厌氧菌则需在无氧环境中放2～3天后生长。个别细菌如结核菌要培养1个月之久。

细菌生长曲线是以细菌数量(活细菌个数或细菌重量)为纵坐标，培养时间为横坐标画得的曲线。典型的细菌生长曲线包括四个时期:调整期、对数期、稳定期、衰亡期。细菌刚接种的一段时间称为调整期，也叫适应期、迟滞期，细菌进入新的生长环境后，需要一段时间适应环境。此时期，细菌生长缓慢。

发明内容

本发明要解决的技术方案在于提供一种利用低温蛋白酶促进细菌生长的方法，所述方法能够促进细菌生长，缩短生长周期，解决细菌培养初期生长缓慢这一问题。

本发明是由以下技术方案实现的：

一种利用低温蛋白酶促进细菌生长的方法，该方法将低温蛋白酶加入到配置好的LB培养基中，添加量为培养基体积的1-5％(g/L)，室温下反应半小时后高温灭菌，按常规操作进行细菌接种培养。

本发明与现有技术相比的有益效果：

发明通过低温淀粉酶与高氏一号液体培养基中的成分进行反应，生成促进放线菌生长小分子物质，效果明显，缩短细菌生长周期，促进细菌生长，较早进入优势期，避免杂菌污染，提高获得菌体繁殖效率。同时在规模化生产上应用时大大降低电力、人力成本。

附图说明:

图1实施例3不同实验组在各时间点的OD值柱状图；

图2实施例3不同实验组在实验时间内的OD值变化曲线图。

具体实施方式

下面通过实施例来对本发明的技术方案作进一步解释，但本发明的保护范围不受实施例任何形式上的限制。

普通蛋白酶最适作用温度较高，一般在30～60℃，室温下酶活较低。低温蛋白酶最适作用温度在20℃左右，以下实施例所用到的低温蛋白酶及其它化学试剂均从市场上购买。

实施例1低温蛋白酶酶解LB培养基促进细菌生长的方法，

该方法是将购买的低温蛋白酶加入配置的LB培养基，通过酶与LB培养基反应，得到更利于细菌生长的环境。具体步骤如下：

①配置250ml LB培养基，在200ml去离子水中加入：胰蛋白胨2.5g，酵母提取物1.25g，NaCl2.5g。摇动容器直至溶质溶解，用5mol/L NaOH调pH至7.0，用去离子水定容至250ml；

②将购买的低温蛋白酶加入配置好的LB液体培养基中，添加量为1g，室温下反应半小时，之后在15psi高压下蒸汽灭菌21min；

③在超净台中接种纯种细菌，例如大肠杆菌，接种1ml大肠杆菌种子液；

④将培养基放入恒温培养箱中，在36±1℃，210r/min条件下培养，培养12～24小时；

⑤培养期间每间隔2h取样10ml，放入试管中在4℃存放，最后一起用紫外分光光度计测600nm处OD值，根据OD值可间接判断细菌生物量多少。

实施例2

该方法是将购买的低温蛋白酶加入配置的LB培养基，通过酶与LB培养基反应，得到更利于细菌生长的环境。具体步骤如下：

①配置500ml LB培养基，在450ml去离子水中加入:胰蛋白胨5g，酵母提取物2.5g，NaCl 5g。摇动容器直至溶质溶解.用5mol/L NaOH调pH至7.0,用去离子水定容至500ml；

②将购买的低温蛋白酶加入配置好的LB液体培养基中，添加量为2.5g，室温下酶解半小时，之后在15psi高压下蒸汽灭菌21min；

③在超净台中接种纯种细菌，例如大肠杆菌，接种2ml大肠杆菌种子液；

④将培养基放入恒温培养箱中，在36±1℃，180r/min条件下培养，培养12～24小时；

⑤培养期间每间隔2h取样10ml，放入试管中在4℃存放，最后一起用紫外分光光度计测600nm处OD值，根据OD值可间接判断细菌生物量多少。

实施例3

该方法是将购买的低温蛋白酶加入配置的LB培养基，通过酶LB培养基反应，得到更利于细菌生长的环境，与未加入低温蛋白酶的空白组中细菌生长状况进行比较。

①配置两瓶250ml LB培养基，在200ml去离子水中加入:胰蛋白胨2.5g，酵母提取物1.25g，NaCl 2.5g。摇动容器直至溶质溶解。用5mol/L NaOH调pH至7.0，用去离子水定容至250ml；

②将生产的低温蛋白酶加入配置好的一瓶LB液体培养基中，添加量为1g，命名为组1，室温下反应半小时，另一瓶LB培养基加入1g去离子水，同样适温环境放置半小时，命名为组2。每组设置两个平行，之后一起在15psi高压下蒸汽灭菌21min；

③在超净台中接种纯种细菌，例如大肠杆菌，组1、组2分别接种1ml大肠杆菌种子液；

④将两瓶LB培养基放入恒温培养箱中，在36±1℃，210r/min条件下培养，培养12～24小时；

⑤培养期间两瓶LB培养基都进行取样，每间隔2h取样10ml，放入试管中在4℃存放，最后一起用紫外分光光度计测600nm处OD值，根据OD值可间接判断细菌生物量多少，实验结果见表1、图1和图2。

本发明并不意味着实施例及说明书所局限，在没有脱离设计宗旨及其原理的前提下可以有所变化。

表1.实施例3的试验结果

本发明并不意味着实施例及说明书所局限，在没有脱离设计宗旨及其原理的前提下可以有所变化。本发明方法不仅促进大肠杆菌生长,对于其它在能够在LB培养基上生长的菌类均有促进作用。