牛ウィルス性下痢症DNAワクチンの免疫効果を増強させる 分子アジュバント（CD63)の検討

摘要

牛ウィルス性下痢ウィルス（BVDV)は，フラ ビウィルス科ぺスチウィルス属に分類されるプ ラス1本鎖RNAウィルスで，牛ウィルス性下痢 症（BVD)の原因ウィルスである.BVDVが妊 娠牛のある時期に感染すると胎子は免疫寛容とな り，持続感染（PI)牛として娩出されて終生ウイルスを排出する.PI牛は生涯にわたり大量のゥ ィルスを排出するため，農場において最大の感 染リスク源となる.BVDの清浄化にはPI牛の摘 発、淘汰に加え，ワクチン接種による妊娠牛への 感染予防が有効である.しかし，市販の生ワクチ ンは妊娠牛への誤つた接種でPI牛の産出および 流産のリスクを伴う.また，不活化ワクチンは安 全性が高いものの，複数回投与が必要なため労力 とコストがかかり，生ワクチンに比べて細胞1生免 疫誘導能が低いといった問題がある.DNAワク 千ンは妊娠牛への接種によるPI牛産出および流 産のリスクがなぐ遺伝子組換え技術を利用す ることにより流行株に迅速に対応可能であり， 液性免疫に加え細胞性免疫も誘導できるといつ た利点を持つ.一方，現在までBVDに対する免 疫原性が高いDNAワクチンの開発には至つて レゝなレ、.CD63 (Lysosome-associated membrane glycoprotein 3, LAMP3)はェクソソームマー カーとして知られており，単球/マクロファージ やT細胞の細胞膜において発現する膜タンパク質 である.本研究では，BVDV1 (Nose株）由来ェ ンべロープタンパク質（E2)を有するDNAベタ ター（pE2)の免疫効果を増強することを目的と して，CD63のアジュバント効果を検討した.pCD63と名付けた.pCD63の遺伝子配列を確認 後，293T細胞に導入し，48時間後にCD63タン パク質の発現をWestern blottingで確認した. 表1に示すようにマウスを群分けし，それぞれに 皮内注射した.21日後に同用量を再度皮内注射 し，2週間後にマウス血液から血清を分離し，脾 臓細胞を採取した.非働化血清を階段希釈して BVDV1 (Nose株）と37°Cで60分間中和反応を 行い，牛胎子筋肉細胞に接種後CPEを観察して 中和抗体価を算出した.また脾臓細胞をBVDV1 (Nose株）株で刺激、培養後，WST-8アツセィ で細胞増殖試験を行うとともに，培養上清中の IFN-yをELISAキットで定量した.得られた データは一元配置分散分析およびボンフェロー 二多重比較検定を用いて統計解析を行い，力く0.05 の場合に有意差として判断した.