Влияние интерференционного замалчивания гена факторов инициации трансляции eIF(iso)G и eIF(iso)E на устойчивость формы клонового подвоя косточковых культур 146-2 и сливы домашней сорта Стартовая к вирусу шарки сливы

摘要

Резюме. Для получения устойчивых к вирусу шарки сливы (PPV) растений клонового подвоя 146-2 и промышленного сорта Стартовая использовался метод РНК-интерференционного сайленсинга генов. Для этого был создан вектор с самокомплементарными последовательностями фрагмента генов eIF (iso)4G и eIF(iso)E длиной 578 п.н. Гены eIF (iso)4G и eIF(iso)E кодируют факторы инициации трансляции, участвующие в жизненном цикле вируса шарки сливы. Для управления экспрессией шпильки был выбран сильный промотор гена рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы (RuBisCo) в полном и укороченном вариантах. Успешная генетическая трансформация была проведена штаммом A. tumefaciens СВЕ21. В качестве источника эксплантата использовали целые листья побегов, культивируемых in vitro. Гены nptII и hpt, кодирующие неомицин II и гигромицин фосфотрансферазы, были использованы в качестве селектируемых маркеров растений. В наших экспериментах получено 5 независимых трансгенных линий подвоя 146-2 и сорта Стартовая, акклиматизированных в тепличных условиях. Их статус подтвержден ПЦР и Саузерн-блоттингом. Эффективность трансформации составила 0,3-0,4 . Полученные растения были инфицированные PPV методом окулировки зараженных почек, устойчивость полученных растений оценивалась методом ELISA. Использование полноразмерного промотора гена малой субъединицы рибулозобифосфаткарбоксилазы (RBCS) при трансформации растений сорта Стартовая приводило к понижению жизнеспособности растений в случае супрессии гена eIF(iso)4E и обеспечивало устойчивость по крайней мере в первый год после инокуляции в случае супрессии гена eIF(iso)4G.