Проведено молекулярно-биологическое исследование клинических штаммов Vibrio parahaemolyti-cus, содержащих гены термостабильного прямого гемолизина (Tdh) и Tdh-родственного гемолизина (Trh). С помощью бл от-гибридизации по Саузерну установлено, что в геномах штаммов, несущих детерминанты обоих гемолизинов (tdh~+trh~+), ген tdh представлен единственной копией, а у tdh~+trh~-штаммов — двумя копиями (tdhl и tdh2). Все изученные нами tdh~+trh~+ и частьtdh~+trh~ штаммов либо не экспрессировали ген tdh (Канагава-негативные, или КР~), либо экспрессировали его слабо и непостоянно (Канагава-промежуточные, КР~(+-)), в отличие от нескольких Канагава-позитивных (КР+) tdh~+trh~- штаммов. Для определения причин КР_/± фенотипов мы секвенировали геныtdh, tdhl и tdh2 13 штаммов, выделенных в России и странах ближнего зарубежья, и провели биоинформационный анализ полученных последовательностейв сравнении с таковыми ряда штаммов, представленных в GenBank. Результаты показали, что слабая экспрессия гена tdh зависит не только от одной точковой мутации в его промоторной области (замене А на G в области —35), как полагали ранее, а в равной степени и от второй замены (G на А в позиции —3 относительно последовательности —10), которая является достаточной в случае отсутствия первой. Поэтому реверсия КР~(-/+-) штаммов, содержащих одну из этих замен, в КР~+ действительно может произойти в результате единственной обратной точковой мутации, и их следует считать потенциально опасными. Штаммы, содержащие обе замены, могут реверсировать с меньшей вероятностью, поскольку для этого необходимы сразу две мутации.
展开▼
