СНИЖЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА МУТАНТНЫХ КОПИЙ МИТОХОНДРИАЛЬНОЙ ДНК В ТКАНЯХ ОБЛУЧЕННЫХ МЫШЕЙ В ПОСТРАДИАЦИОННЫЙ ПЕРИОД

摘要

Анализировали изменение количества мутантных копий митохондриальной ДНК (мтДНК) в тканях головного мозга и селезенки мышей после Х-облучения в дозе 5 Гр. Для этого гетеродуплексы, полученные гибридизацией продуктов ПЦР мтДНК (ген ND3 и два участка D-петли) облученных и контрольных мышей, подвергали гидролизу нуклеазой CelI, специфически расщепляющей участки ДНК с неспаренными основаниями. Гетеродуплексы, полученные гибридизацией продуктов ПЦР мтДНК облученных и контрольных мышей, расщепляются ОД-нуклеазой в большей степени, чем гетеродуплексы продуктов ПЦР мтДНК тканей мышей контрольной группы. Это указывает на наличие мутаций в участках мтДНК облученных мышей. Расщепление нуклеазой гетеродуплексов, полученных гибридизацией продуктов ПЦР мтДНК (гена ND3 и участков D-петли) из тканей мышей на 8-й день после их облучения,существенно выше, чем расщепление гетеродуплексов, полученных гибридизацией продуктов ПЦР мтДНК, изолированной из тканей мышей на 14-й и 28-й дни пострадиационного периода. Эти результаты свидетельствуют о снижении количества копий мтДНК с мутациями в тканях облученных мышей до 28-дневного пострадиационного срока. Особенно значительное снижение уровня мутантных копий мтДНК к этому сроку регистрируется в селезенке. Общее количество копий мтДНК в тканях мозга и селезенки мышей, оцениваемое методом ПЦР в реальном времени, относительно ядерного генаbate-актина, также снижено на 8-28-й дни после их облучения на 30-50% по сравнению с контролем. Результаты исследования позволяют предполагать, что из тканей облученных животных в пострадиационный период элиминируются мутантные копии мтДНК. Наблюдаемая элиминация может рассматриваться как результат избирательной деградации митохондрий, несущих мутантные копии ДНК, так и продолжающейся клеточной гибели в тканях облученных животных.