РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ СЕЛЕКТИВНОЙ ЭЛИМИНАЦИИ БЕЛКОВ В РАСТИТЕЛЬНЫХ КЛЕТКАХ

摘要

Разработан метод направленной элиминации определенных внутриклеточных белков в растениях за счет использования убиквитин-протеасомной системы клетки. Получены два делеционных варианта убиквитин-лигазы ЕЗ (Chip) A. thaliana, несущих домен узнавания белка-мишени GFP. Взаимодействие GFP и химерной убиквитин-лигазы подтверждено с помощью дрожжевого дву-гибридного анализа. Методами флуоресцентной микроскопии и флуориметрии показано, что при инфильтрации растений N. benthamiana, экспрессирующих ген gfp, агробактериями, несущими гибридный ген ЕЗ убиквитин-лигазы Chip с доменом узнавания белка GFP, наблюдается существенное снижение сигнала флуоресценции для обоих вариантов - как при делеции N-кондевого домена размером в 100 аминокислот, так и при делеции размером 140 аминокислот.