Прометафазный кариотип линии СПЭВ содержит две гетероморфные пары ядрышковых организаторов, принадлежащих хромосомам 8а и 8, 10L. и 10s. Явлением гетероморфизма воспользовались для хромосомной дифференциации интерфазных ядрышковых организаторов (ИЯО). Были исследованы двухмерные (2D) препараты фиксированных метанолом клеток СПЭВ, растянутых на поверхности предметного стекла без применения гипотонии. Значительная часть интерфазных клеток на 2О-препаратах содержала 3—4 структуры линейной конфигурации, расположенные в доменах ядрышек. Эти структуры были позитивными при наблюдении методом фазового контраста и после окрашивания DAPI. С помощью рДНК-FISH было установлено, что они представляют собой ИЯО. Самый крупный из ИЯО индивидуальной клетки обычно содержал яркий терминальный сигнал рДНК-FISH/DAPI-окрашивания, что указывает на его принадлежность хромосоме 8а. Известно, что в реакции серебрения ядрышек на мазках периферических лимфоцитов человека, осуществленной после фиксации метанолом, участвуют в основном белки фибриллярных центров. Показано, что такая же специфичность серебрения ядрышек скорее всего характерна и для 2О-препаратов клеток СПЭВ, фиксированных метанолом. Как посеребренные, так и окрашенные методом рДНК-FISH, ИЯО имели либо четковидную, либо дискоидальную структуру разной степени разрешения. Дискоидальные ИЯО состояли из поперечных аргентофильных структур — плотных дисков и рыхлых междисков. В высокоразрешенных дискоидальных ИЯО наблюдали продольное расщепление (двунитчатость) зоны междисков. Четковидные ИЯО состояли из аргентофильных бусин, Которые были примерно вдвое уже аргентофильных дисков, и однонитчатой или Ag-негативной зоны между бусинами. Среди ИЯО с высоким разрешением структуры были найдены четыре воспроизводимых паттерна серебрения, которыеможно было объединить в две гомологичные группы. Поскольку каждый из таких паттернов был к тому же уникальным для индивидуальной клетки, сделано заключение о том, что они являются хромосомоспецифичными. С использованием данных прометафазного анализа была определена хромосомная принадлежность ИЯО воспроизводимых паттернов серебрения. ИЯО, принадлежащие разным хромосомам, были сопоставлены между собой по средней длине и среднему числу аргентофильных бусин, а также по отношению длин и отношению числа аргентофильных бусин, рассчитанным для разных пар ИЯО индивидуальной клетки. Оба отношения, определенные для наиболее гетероморфной пары гомологичных хромосом 8а и 8, составляли лишь1.26 * 0.02. Для сравнения: аналогичное 8а/8 отношение длин ядрышковых организаторов, рассчитанное для индивидуальных про-метафазных клеток, было равно 2.92 = 0.30.
展开▼
