ТРАНСКРИПЦИОННЫЙ ФАКТОР ZF5 РЕГУЛИРУЕТ В КЛЕТКАХ ГЕПАТОМЫ HepGl ЧЕЛОВЕКА ЭКСПРЕССИЮ ГЕНА, СОДЕРЖАЩЕГО В S'-РЕГУЛЯТОРНОМ РАЙОНЕ GCC-ТРИПЛЕТНЫ

摘要

Ядерные белки опухолевых клеток человека линий HeLa и HepG2 способны связываться с триплет-ными иуклеотидными повторами типа (GCC)_n> з в 5'-регуляторных районах ряда генов млекопитающих — GCC-элементами. Промотор гена рибосомного белка L32 (rpL32) мыши содержит GCC-элемент в позиции -17 ... -6 пар нуклеотидов (п. н.) относительно точки инициации транскрипции. Мы предположили, что одним из взаимодействующих с GCC-элементом rpL32 ядерных белков HepG2 (с мод. массой около 52 кДа) может быть высококонсервативный фактор транскрипции млекопитающих ZF5, содержащий цинк-фиигерный ДНК-связывающий домен. Рекомбинантный белок GST-ZF5, содержащий ДНК-связывающий домен ZF5, сплавленный с бактериальной глутатион-S-трансферазой, специфически взаимодействует с триплетными повторами (GCC>9, с консенсусной GC-богатой последовательностью для связывания с ZF5 — 5'-GCGCGC-3', но особенно эффективно — с участком промотора гена rpL32 (-24 ... +11 п. н.). Высокая аффинность связывания ZF5 с участком промотора rpL32 (-24 ... +11 п. н.), на нашвзгляд, объясняется включением в его состав по соседству с триплетными GCC-повторами достаточно выраженной консенсусной для связывания ZF5 нуклеотидной последовательности. Ген кДНК ZfS былклонирован из клеток HepG2 с использованием метода ретро-ПЦР. В экспериментах по котранс-фекции клеток HepG2 эукариотический вектор экспрессии кДНК гена Zf5 специфически подавляет активность промотора rpL32 (-155 ... +159 п. н.), содержащегоGC-богатую нуклеотидную последовательность. Таким образом, идентифицированный нами в клетках HepG2 продукт экспрессии гена ZfS способен регулировать транскрипцию генов, содержащих в регуляторных районах триплетные повторы (ОСС)_n (где л = 3—9).