РЕАКЦИИ ОКИСЛЕНИЯ НАДН ТЕТРАЗОЛИЕМ И УБИХИНОНОМ, КАТАЛИЗИРУЕМЫЕ ДРОЖЖЕВОЙАЛКОГОЛЬДЕГИДРОГЕНАЗОЙ

摘要

Изучены процессы окисления НАДН в водных и водно-спиртовых буферных растворах пара-нитро-тетразолием фиолетовым и убихононом, катализируемые изолированной дрожжевой алкогольдегид-рогеназой. В водном растворе при рН 6—7 в присутствии пара-нитротетразолия реакция окисленияНАДН протекала чрезвычайно медленно вследствие ингибирования фермента остающимся на нём гидрофобным продуктом, формазаном, образующимся при восстановлении пара-нитротетразолия. Однако при подщелачивании среды до рН 8—9 или добавлении спирта (этанола или изопропанола) формазан десорбировался с фермента, вследствие чего НАДН окислялся с достаточной скоростью. Предполагается, что эта редуктазная реакция можетбыть использована в качестве удобного колориметрического метода измерения активности семейства различных алкогольдегидрогеназ. Во всём диапазоне рН не наблюдалось восстановления тетразолия спиртом. Реакция окисления НАДН в присутствии фермента и убихонона также протекала довольно медленно даже при добавлении спирта, но активировалась при подкислении среды до рН 5.5—6.0. При замене трис-фосфатного буфера на HEPES был обнаружен квази-колебательный режим: окисление НАДН убихиноном до НАД+ с последующим его обратным восстановлением спиртом до НАДН.