ОБНАРУЖЕНИЕ ЛЕКТИНОВ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК С ПОМОЩЬЮ ФОТО АФФИННОГО МЕЧЕНИЯ

摘要

Ранее мы использовали явление повышенной экспрессии лектинов на поверхности опухолевых клеток для адресной доставки липосом, нагруженных цитотоксическими агентами, к злокачественным клеткам in vitro N in vivo за счет встроенных в липидный бислой липосом липофильных гликоконъ-югатов - углеводных векторов. С целью изучения процесса связывания векторных липосом с опухолевыми клетками и выявления специфических рецепторов нами проведена серия экспериментов т 11го по фотоаффинному мечению клеток меланомы МЗ липосомами, несущими неогликолипид-иые зонды с детерминантами трисахарид А (I) и тетрасахарид шалил-Льюис X (II), а также проми-елоидных клеток НЬ-60 - фотореактивными липосомами с трисахаридом сульфат-Льюис А (III). Зонды представляют собой конъюгаты гликозидов и гас-1,2-диолеоилглицерина, соединенные оли-гоэтиленгликольиым спейсером (степень полимеризации 9-16), и содержат в непосредственной близости от углеводного участка карбен-генерирующую диазоциклопентадиен-2-илкарбонильную (Оср) группировку, несущую 1251-метку. Для детектирования связывания углеводной детерминанты с рецептором (ами) на поверхности опухолевых клеток использованы малые времена инкубации (5- 10 мин) с липосомами в присутствии возрастающих концентраций свободных углеводов. После фотолиза и делипмдизирования органическими растворителями, клеточный материал подвергали электрофорезу в ПААГ с последующей авторадиографией. Наблюдалось радиоактивное мечение ряда зон, соответствующих белкам с различными молекулярными массами, причем профили мечения существенно различались для разных зондов и клеток. Несмотря на тщательное делипидизирование перед проведением электрофореза в системе с ЗБ8, картина радиомечения сильно усложнялась фоном нековалентно связанных гликолипидных зондов или продуктов их липид-липидных сшивок. Для контроля неспецифического связывания проводили фотоаффинное мечение липосомами, несущими (125I)Бср-зонд с неактивным пентаолом аминоглюцитом. При детальном анализе радиоактивности зон на электрофореграммах после вычитания пиков неспецифического и фонового мечения выявлены следующие связывающие зонды белки: на клетках МЗ с зондом (I) - минорный белок с массой ~ 18 кДа, с зондом (II) - белки 43, -60, -64 и -80 кДа (максимальный пик - на 60 кДа); на клетках НЬ-60 с зондом (III) - 36, 43, ~48, ~54, ~66 и область 75-85 кДа. Анализ литературных данных показал, что обнаруженные рецепторы, опосредующие процесс взаимодействия с векторными липосомами, могут быть отнесены к некоторым известным лектинам клеток млекопитающих.