НОВЫЙ МЕТОД КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕРОИДНЫХ МЕТАБОЛИТОВ ЦИТОХРОМ Р450-ЗАВИСИМЫХ РЕАКЦИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ СПЕКТРОСКОПИИ

摘要

С помощью флуоресцентного анализа продукта реакции разработали метод определения гидрокси-лазной активности изоформы цитохрома Р450 CYP3A4 по отношению к субстрату гидрокортизону.Образующийся в результате СYРЗА4-зависимого электрокатализа бβ-гидроксикортизол после обработки смесью серной кислоты и этанола (3 : 1) при возбуждении λ = 365 нм имел характеристическую флуоресценцию при λ = 427 ± 2 нм,отличающуюся от флуоресценции субстрата гидрокортизона (λ - 525 ± 2 нм).Предел определяемых концентраций бр-гидроксикортизола составил 0,32 мкМ.Разработанный аналитический подход использовали для определения кинетических параметров СYРЗА4-зависимого гидроксилирования гидрокортизона.