После 27 лет хранения в жидком азоте был возобновлен рост суспензионной культуры клеток люцерны (Medicago sativa L.). Исследовано действие факторов, влияющих на уровень жизнеспособности клеток люцерны in vitro, а также их цитогенетические и физиологические характеристики после хранения при температуре жидкого азота (—196°С). В результате процедуры замораживания—оттаивания погибало около 80% преимущественно полиплоидных клеток, при этом основным повреждающим фактором являлся осмотический стресс. Таким образом, после криогенного хранения культура клеток была представлена преимущественно окологаплоидными и околодиплоидными клетками. Через 35 циклов роста в возобновленной популяции установилось динамическое равновесие клеток разных уровней плоидности с модальным классом (более 50%) полиплоидных клеток. Особенностью исследуемого штамма является высокая активность пероксидазы (ПО). После криогенного хранения отмечено существенное снижение активности ПО, однако в течение 35 циклов выращивания происходило постепенное увеличение активности фермента до уровня, характерного для исходной (до замораживания) культуры клеток. Для защиты клеток от эндогенного льдообразования использовали криопротектор диметилсульфоксид (ДМСО). Установлено, что ДМСО в концентрации 7% был мало эффективен для защиты клеток от осмотического стресса, не обладал значительным антирадикальным действием по отношению к супероксид-аниону, но оказывал влияние на жизнеспособность возобновленных клеток, активность ПО и альдегидредуктазы и уровень пере-кисного окисления липидов.
展开▼
