НОВЫЙ МЕТОД ТРАНСФЕКЦИИ МОРСКОЙ БАКТЕРИИ Pseudoalteromonas espejiana ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТОЙ БАКТЕРИОФАГА РМ2

摘要

ДНК бактериофага РМ2 является удобным тест-объектом при исследованиях повреждающего действия генотоксичных агентов. Степень повреждения может оцениваться по способности поврежденной ДНК к трансфекции клеток хозяина — морской бактерии Pseudoalteromonas espejiana (Рае), str, BAL-31. Обнаружено, что эффективность трансфекции линий Рае, которые длительное время поддерживались без замораживания, стала очень низкой при использовании общепринятого метода трансфекции по van der Schans et al. (1971 г.). Такие культуры, выращенные в стандартной для Рае среде с 10 мМ Са~(2+). содержали агрегаты клеток и экзополимерный материал. Найдено, что Рае может расти в среде, не содержащей добавки кальция в присутствии хелатора EGTA ("низкокальциевая среда". НКС). После роста в НКС клетки не агрегировали, культуры не имели активности нуклеазы BAL. а эффективность трансфекцииклеток, которые росли в НКС, резко возросла. На основании этих результатов разработана новая процедура трансфекции. имеющая эффективность 2 х 10~4-2 х 10~5 инфекционных центров на микрограмм ДНК РМ2.