АНАЭРОБНЫЙ СИНТЕЗ ЯНТАРНОЙ КИСЛОТЫ РЕКОМБИНАНТНЫМИ ШТАММАМИ Escherichia coli С АКТИВИРОВАННЫМ НАД+-ВОССТАНАВЛИВАЮЩИМ ПИРУВАТДЕГИДРОГЕНАЗНЫМКОМПЛЕКСОМ

摘要

Исследовано влияние конститутивной экспрессии генов aceEF-lpdA оперона, кодирующих ферменты НАД+-восстанавливающего пируватдегидрогеназного комплекса, на анаэробную продукцию янтарной кислоты из глюкозы рекомбинантными штаммами Escherichia coli. Базовые штаммы-продуценты были получены за счет инактивации в клетках штамма Е. coli MG1655 основных путей образования уксусной и молочной кислот, путем делеции генов ackA,pta,poxB и IdhA(SGM0.1), и дополнительного введения пируваткарбокси-лазы Bacillus subtilis (SGM0.1 [pPYC]). Конститутивная экспрессия генов aceEF-lpdA в потомках базовых штаммов SGM0.1 P_L-aceEF-lpdA и SGM0.1 P_L-aceEF-lpdA [pPYC] была обеспечена заменой нативной регуляторной области оперона промотором P_L фага лямбда. Молярные выходы янтарной кислоты при анаэробном сбраживании глюкозы штаммами SGM0.1 P_L-aceEF-lpdA и SGM0.1 P_L-aceEF-lpdA [pPYC] превосходили соответствующие показатели контрольных штаммов на 2 и 33% в отсутствие, и на 9 и 26% в присутствии в среде иона НСO_3 Сделан вывод, что увеличение продукции янтарной кислоты штаммом SGM0.1 Р_L-aceEF-lpdA [pPYC] относительно штаммов SGM0.1 и SGM0.1 [pPYC], продуцирующих данное вещество в восстановительной части цикла трикарбоновых кислот, обусловлено активацией глиоксилатного шунта.