Изучено взаимодействие церулоплазмина (ЦП, КФ 1.16.3.1), медьсодержащего белка плазмы крови, с двумя синтетическими пептидами Р15 и Р16, соответствующими по структуре нецитозольным участкам медьтранспортной АТР-азы P1-типа (АТР7А), предполагаемого продукта гена болезни Менкеса (Atp7a). Пентадекапептид (Р15) и гексадекапептид (Р16) синтезированы твердофазным методом. Они соответствуют фрагментам двух внеклеточных петель АТР7А: Р16 - участку петли, которая предположительно участвует в переносе ионов меди, а Р15 - не участвует. Методом белкового футпринтинга показано, что Р16 связывается с фрагментом домена 6 молекулы ЦП. Кинетика связывания ЦП с Р16 изучена методом аффинной хроматографии на макропористом диске с иммобилизованным Р16, определена K_d (1.5 х 10~(-6) М) этого взаимодействия. В работе обсуждается участие АТР7А в передаче ионов меди внепеченочные клетки.
展开▼
机译:研究了血浆铜蓝蛋白铜蓝蛋白(CP,EC 1.16.3.1)与两个合成肽P15和P16的相互作用,这些肽在结构上对应于Menkes病基因(Atp7a)的推定产物P1型铜ATPase(ATP7A)的非胞质区域。采用固相法合成五肽(P15)和六肽(P16)。它们对应于ATP7A的两个胞外环的片段:P16是一个环区域,据推测与铜离子的转移有关,而P15不参与。蛋白质足迹显示,P16与CP分子的结构域6的片段结合。通过在固定有P16的大孔圆盘上进行亲和色谱研究了CP结合P16的动力学;测定了该相互作用的K_d(1.5 x 10〜(-6)M)。本文讨论了ATP7A参与铜离子向肝外细胞转移的过程。
展开▼