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Studies on the basic issues relevant to sperm cryopreservation in humans

机译：对人类精子冷冻保存相关的基本问题研究

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Rapid freezing and vitrification are becoming popular for sperm freezing in humans; however, basic and critical issues relevant to sperm cryopreservation remain to be resolved. The aims of the present study were to study the effects of osmolality of freezing medium, sperm concentrations, thawing methods, and sugars (sucrose and trehalose) on sperm motility and DNA integrity by rapid freezing using 0.5?ml standard straws loaded with 100?μl sperm each. The results showed that (1) the post-thaw recovery rates of total motility and progressive motility of sperm cryopreserved in freezing medium containing 0.25?M sucrose with 442?mOsm/kg osmolality were significantly higher ( p ??0.05) by sperm concentrations in the range from 5 to 20?×?10~(6)?sperm/ml, (3) thawing method 37°C for 2?min was better than 42°C for 15?s in terms of post-thaw recovery rates of both total and progressive motilities ( p ?
机译：快速冷冻和玻璃化正遭受人类的精子冻结;但是，与精子冷冻保存有关的基本和关键问题仍有待解决。本研究的目的是研究渗透介质，精子浓度，解冻方法和糖（蔗糖和海藻糖）对精子运动性和DNA完整性的渗透性的影响，通过使用0.5μl的标准吸管快速冷冻，每一个。结果表明，（1）在含有0.25Ω蔗糖的冷冻培养基中，精子冷冻保存的总动力和渐进运动的后解冻恢复速率显着高于442Ω·βmOmolably（p？<〜0.05）在含有0.25Ω蔗糖的冷冻培养基中冷冻保存，蔗糖为536Ω·kg渗透压（36.5？±2.8％和36.9？±1.7％与30.4？±1.9％和30.3？±2.9％），（ 2）通过5至20Ω·×10〜（6）α×10〜（3）的精子浓度，总共和渐进动力的冷冻保存（P？> 0.05）没有显着影响（p？> 0.05）？Sperm / ml，（3）解冻方法37°对于总共和渐进动力的后解冻回收率（P？<0.05），（4）0.25≤M海藻糖优于0.25Ω，C 2℃的2？min优于42°C而优于42°C。在冷冻保存中蔗糖既有总和渐进的动力（p？<β05），结论是，通过使用0.25μm蔗糖或海藻糖在高精度浓度下快速冷冻，通过使用0.25Ω蔗糖或海藻糖的快速冷冻可以最好地冷冻保存人精子。海藻糖是比蔗糖更强烈的冷冻保护剂，用于精子冷冻保存。关键词：人，快速冻结，精子，蔗糖，海藻糖表因植物Cryemervation对人类生育保存和辅助繁殖至关重要。虽然传统的慢速冷冻方法仍然广泛用于人精子冷冻保存，但〜（1）近年来快速冷冻和超快速冷冻（也称为玻璃化）的方法由于其效率，简单性和成本效益，近年来变得流行以及其在冷冻保存精子运动和DNA完整性方面对缓慢冷冻方法的优势。〜（2-7）特别是快速冷冻和玻璃化依赖于非渗透冷冻保护剂（CPA），包括蔗糖和海藻糖，用于精子冷冻保存省略渗透CPa如甘油对人精子的有害影响。〜（4,6,8）快速冷冻和玻璃化仍然是新的精子冷冻保存技术，并且存在一些基本和关键的问题仍有待解决。首先，虽然0.25？M蔗糖已被广泛用作快速冷冻和玻璃化的CPA，但〜（5,6,9）冻融介质的报告的制备方法不同。在一些报告中，通过在水中与精子悬浮液在水中混合0.5μm蔗糖在体积的比例中混合来制备冷冻培养基，得到最终的0.25Ω蔗糖浓度，〜（2,6,9,10），但在其他报告，通过将1体积的0.5μm蔗糖在培养基中混合1体积的精子悬浮液，制备冷冻培养基。〜（11,12）给出不同的方法，以不同程度的渗透性和精子运动的事实对冷冻介质渗透压特别敏感，〜（13-16）需要进一步研究以确定哪种制备方法更好地用于精子冷冻保存。其次，最初报道的应用快速冻结和人精子的玻璃化描述了具有低精子浓度的样品的冷冻保存，〜（10,11,17,18），并且目前尚不清楚可以有效地冷冻保存具有高精度浓度的样品。此外，虽然报道了不同的​​解冻温度和时间长度，但〜（7,10-12,17-19）未经执行这些方法的系统比较以确定最佳解冻方法。最后，海藻糖具有比蔗糖的较高的玻璃化转变温度高，〜（20），并且据报道，0.1Ω·摩尔/升海藻糖优于0.25Ω·摩尔/载蔗糖，通过玻璃化在开放式稻草系统中进行玻璃化，〜（8）但尚未将0.25μs海藻糖与相同的人精子蔗糖进行比较。本研究的目的是研究渗透介质，精子浓度，解冻方法的渗透压的影响和糖（蔗糖和海藻糖）在0.25Ωm的精子运动和DNA完整性通过使用0.5μl的标准秸秆的快速冷冻，每种标准吸管每种用于优化和标准化人类的精子冷冻保存技术和方法。除非另有说明，否则从Sigma-Aldrich Co.（中国上海）购买的试剂。根据Quinn的方法制备含有5μlmO/ ml人血清白蛋白（HSA）的人输卵管液（HTF）培养基

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