Valida??o das rea??es de hibridiza??o in situ cromogênica para detec??o de DNA e RNA em tecidos fixados em formalina e incluídos em parafina

摘要

Introducción: La hibridación in situ cromogénica (CISH) es una alternativa a los métodos tradicionales inmunohistoquímicos para el diagnóstico de enfermedades infecciosas en muestras fijadas en formoly embebidas enparafina, puesto que tiene alta sensibilidad y especificidad. Este tipo de muestra sufre diversas modificaciones químicas durante elprocesamiento histológico, y tanto la mala fijación cuanto la fijación excessiva pueden perjudicar la calidad de las muestras, impidiendo buenos resultados. En la CISH, es común el empleo de muestras positivas para control de calidad de reacciones; sin embargo, esta práctica no proporciona ninguna información acerca de la preservación del material genético. Objetivo: El propósito de este estudio ha sido realizar la validación de las sondas comerciales para ácido desoxirribonucleico (ADN) (+) y (-) y ácido ribonucleico (ARN) (+) y (-), para que sean utilizadas como control de calidad, evaluando la preservación del material genético en las muestras testadas. Material y métodos: Se incluyen en el estudio 12 cortes histológicos (en cuadruplicado, n = 48), confeccionados a partir de un pool de tejidos sin alteraciones microscópicas relacionadas con procesos infecciosos y/o inflamatorios. El protocolo de CISH se desarrolló de acuerdo a las instrucciones del fabricante y bajo las condiciones del nuestro laboratorio, haciendo uso de sondas comerciales de ADN y ARN quimicamente ligadas a digoxigenina. Resultados y conclusión: Nuestros resultados han sido muy satisfactorios, demostrando alta reproducibilidad, exactitud, sensibilidad, y especificidad analítica, así como altos valores predictivos para ensayos positivos y negativos, y con proporción nula de falsos negativos y falsos positivos, lo que ha permitido la validación de esa reacción.↓RESUMO Introdu??o: A hibridiza??o in situ cromogênica (CISH) é uma alternativa aos métodos tradicionais imuno-histoquímicospara diagnóstico de doen?as infecciosas em amostras fixadas em formalina e incluídas em parafina, visto que apresenta grande sensibilidade e especificidade. Esse tipo de amostra sofre diversas modifica??es químicas durante o processamento histológico, e tanto a má fixa??o quanto a fixa??o em excesso podem prejudicar a qualidade das amostras, inviabilizando bons resultados. Na CISH, é comum a utiliza??o de amostras positivas como controle de qualidade das rea??es; entretanto essa prática n?o fornece nenhuma informa??o a respeito da preserva??o do material genético, nem evita resultados falso-negativos nas amostras testadas. Objetivo: O objetivo deste estudo foi realizar a valida??o das sondas comerciais para ácido desoxirribonucleico (DNA) (+) e (-) e ácido ribonucleico (RNA) (+) e (-), para serem utilizadas como controle de qualidade, avaliando apreserva??o do material genético nas amostras testadas. Materiais e métodos: Foram utilizados 12 cortes histológicos (em quadruplicata, n = 48), confeccionados a partir de um pool de tecidos sem altera??es microscópicas relacionadas com processos infecciosos e/ou inflamatórios. O protocolo de CISH foi conduzido de acordo com as instru??es do fabricante e padronizado conforme as condi??es do nosso laboratório, utilizando sondas comerciais de DNA e RNA quimicamente ligadas à digoxigenina. Resultados e conclus?o: Nossos resultados foram muito satisfatórios, demonstrando alta reprodutibilidade, acurácia, sensibilidade e especificidade analítica, bem como altos valores preditivos para ensaios positivos e negativos e com propor??o nula de resultados falso-negativos e falso-positivos, o que possibilitou a valida??o dessa rea??o.