Desenvolvimento e valida??o de método analítico para quantifica??o de diclofenaco de dietilam?nio em pele humana por cromatografia líquida de alta eficiência

摘要

Foi desenvolvido e validado neste estudo um método analítico para quantifica??o de diclofenaco de dietilam?nio em pele humana por cromatografia líquida de alta eficiência, segundo a Resolu??o 899/2003 da Agência Nacional de Vigilancia Sanitária (ANVISA). Empregou-se cromatografia em fase reversa com coluna C18 150 x 4,6 mm, 5 μm Shimpack?, à temperatura de 40 oC e fase móvel, constituída por mistura de acetonitrila e tamp?o fosfato de sódio 20 mM pH 3,0 (70:30, v/v) com fluxo de 1,2 mL min-1. Os analitos foram detectados por UV a 280 nm e o método foi especifico, preciso, exato, robusto e linear no intervalo de 0,05 a 20 μg mL-1 (R2 = 0,998), mostrando que pode ser utilizado em estudos de penetra??o cutanea in vitro tendo como modelo de membrana a pele humana. Palavras-chave: Diclofenaco dietilam?nio. Reten??o cutanea. Valida??o. ABSTRACT Development and validation of an analytical method for quantitation of diclofenac diethylamine in human skin by high performance liquid chromatography An analytical method has been developed and validated for the quantitation of diclofenac diethylamine (DDA) in human skin by high performance liquid chromatography (HPLC), in accordance with Regulation 899/2003 of the National Sanitary Surveillance Agency (ANVISA). The HPLC column was a reversed-phase Shimpack? C18, with a 5 μm particle bed, measuring 150 x 4.6 mm i.d., eluted isocratically at 40?C with 20 mM sodium phosphate buffer (pH 3.0):acetonitrile (30:70, v/v), the mobile phase flowing at 1.2 mL min-1. Analytes were measured by a UV detector set at 280 nm. The results revealed that the method was specific, precise, accurate, robust and linear (R2=0.998) in the range from 0.05 to 20 μg mL-1. Therefore, it can safely be used to assess DDA in vitro penetration of human skin in kinetic studies.