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Cytogentic analysis of human dermal fibroblasts (HDFs) in early and late passages using both karyotyping and comet assay techniques

机译:使用核型分析和彗星分析技术对人类早期和晚期传代的人类皮肤成纤维细胞(HDF)进行细胞遗传学分析

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摘要

Human dermal fibroblasts (HDFs) are a potential source of somatic cells for genetic manipulation and tissue engineering. Confirmation of cytogenetic stability of these cells is an essential step for cell nuclear transfer and generation of a suitable and functional induced pluripotent stem cells line. HDF cells were isolated and cultured from human foreskin samples. Cytogenetic stability of these cells was evaluated in early (3–4) and late (10–15) passages using karyotype test and alkaline comet assay techniques. HDF cells in early and late passages showed normal karyotype but by comet assay abnormality and DNA damages in late passages of HDFs were observed. Also, the parameters of alkaline comet assay in early passages of HDFs compared with late passages and positive control groups more significantly were different (p?
机译:人类皮肤成纤维细胞(HDFs)是用于基因操作和组织工程的体细胞的潜在来源。这些细胞的细胞遗传学稳定性的确认是细胞核转移和产生合适且功能性诱导的多能干细胞系的必要步骤。从人包皮样品中分离并培养HDF细胞。使用核型试验和碱性彗星试验技术评估了这些细胞在早期(3-4)和晚期(10-15)的细胞遗传学稳定性。早期和晚期传代的HDF细胞显示出正常的核型,但是通过彗星分析异常并且观察到HDF的晚期传代中的DNA损伤。另外,与早期传代和阳性对照组相比,HDF传代的碱性彗星试验参数更显着不同(p <0.05)。这些发现表明,HDF细胞中可能发生了许多传代后的单链断裂或DNA损伤。我们的结果表明,只有HDF细胞的早期传代才能保持细胞遗传学稳定性,并且是基因重编程的良好候选者。总之,不能单独使用核型检查来检测所有细胞遗传异常和DNA损伤的迹象。因此,为了精确评估成纤维细胞的DNA损伤和细胞遗传学的不稳定性,彗星试验和核型技术可以相互补充。

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