Padroniza??o da titula??o da toxina épsilon de Clostridium perfringens tipo D em linhagem contínua de células como alternativa ao bioensaio animal

摘要

Enterotoxemia, também chamada de doen?a do rim pulposo, doen?a que acomete os ruminantes domésticos, é causada pela a??o da toxina épsilon produzida pelo Clostridium perfringens tipo D, um anaeróbio comumente isolado do solo e das fezes de animais sadios. O método tradicional de diagnóstico baseia-se na detec??o e classifica??o dessa exotoxina no conteúdo intestinal por meio da soroneutraliza??o em camundongos. Com isso, o objetivo deste estudo foi padronizar um teste para detec??o e titula??o dessa toxina in vitro e compará-lo ao fen?meno in vivo. Para isso, uma partida de toxina épsilon de Clostridium perfringens tipo D foi titulada em camundongos e em várias linhagens contínuas de células. Após a determina??o da linhagem celular mais sensível, realizaram-se ensaios de titula??o in vitro de dilui??es de uma partida de toxina, comparando-os com os títulos in vivo conhecidos. Os resultados foram agrupados, e foi desenvolvida a equa??o matemática que melhor adaptou-se aos intervalos trabalhados. A linhagem MDCK, além de mais sensível, demonstrou que o fen?meno observado in vitro pode ser expresso por meio da equa??o matemática que apresenta uma correla??o de 98,33%, com a dose mínima mortal determinada in vivo. Portanto, a linhagem MDCK permite titular a toxina épsilon de C. perfringens tipo D de forma específica e sensível, além de ser uma técnica prática, rápida e que dispensa o uso de animais.