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【24h】

Fecunda??o e clivagem após a ativa??o da proteína quinase C durante a matura??o de oócitos bovinos

机译:牛卵母细胞成熟过程中蛋白激酶C激活后的受精和卵裂

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摘要

A forma??o de pró-núcleos, clivagem e perfil protéico foram avaliados após a ativa??o da proteína quinase C (PQ-C) durante a matura??o de complexos cumulus-oócito (CCOs) bovinos. Visando a determinar estes efeitos da PQ-C, 1936 CCOs foram distribuídos aleatoriamente em 4 tratamentos, sendo maturados na presen?a de PMA (100nM phorbol 12-myristate 13-acetate, ativador da PQ-C), de 4alfa-PDD (100nM de 4alfa-phorbol 12,13-didecanoetate, forbol éster que n?o ativa a PQ-C; controle forbol éster), de SVE (10% de soro de vaca em estro, controle positivo) e de um controle negativo constituído pelo meio de matura??o básico para os demais tratamentos, com exce??o do SVE, onde n?o foi adicionado o álcool polivinílico (PVA). Os CCOs foram mantidos na presen?a de PMA por 1, 4 e 7 horas, sendo após, transferidos para o meio básico de matura??o até que se completassem 24 horas de cultivo. A estimula??o da PQ-C, por esses períodos, n?o alterou a forma??o de pró-núcleos, porém, diminuiu a percentagem de clivagem dos zigotos. Os resultados do grupo 4alfa-PDD comprovam que as altera??es ocorridas no grupo PMA s?o devido à ativa??o da PQ-C e n?o a??o direta do forbol éster na célula. A análise da composi??o protéica demonstrou uma banda de proteína adicional no grupo SVE ao redor de 74 kilo Daltons (kDa). Os resultados desse estudo, quando associados aos dados preliminares de Western blot, indicam a importancia da PQ-C na regula??o da matura??o, fecunda??o e clivagem de embri?es bovinos.
机译:在牛卵丘-卵母细胞复合物(CCO)成熟期间,蛋白激酶C(PQ-C)激活后,评估了前核的形成,切割和蛋白质谱。为了确定PQ-C的这些作用,将1936个CCO随机分配到4种处理中,并在存在PMA(100nM佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯,PQ-C激活剂),4alpha-PDD(100nM)的条件下成熟4α-佛波醇12,13-十二烷酸酯,不激活PQ-C的佛波酯,佛波酯对照),EVS(10%发情的牛血清,阳性对照)和阴性对照,由除了不添加聚乙烯醇(PVA)的EVS以外,其他处理的基本成熟度。将CCO在PMA存在下保持1、4和7小时,然后将它们转移到基本成熟培养基中,直到完成24小时的培养为止。在这些期间,对PQ-C的刺激并没有改变前核的形成,但是,它降低了受精卵分裂的百分比。 4alfa-PDD组的结果表明,PMA组发生的变化是由于PQ-C的激活而不是酯佛波醇在细胞中的直接作用。蛋白质组成的分析显示,EVS组中存在一个额外的蛋白质带,约为74千道尔顿(kDa)。这项研究的结果与初步的蛋白质印迹数据相关,表明PQ-C在调节牛胚胎的成熟,受精和卵裂中具有重要作用。

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