应用双抗体夹心酶联免疫吸附法定量检测白喉类毒素抗原

摘要

目的对定量检测白喉类毒素（DT）抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）进行方法学验证并初步应用。方法以白喉抗毒素（DA）为包被抗体,大鼠抗DT抗体为检测抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗大鼠IgG抗体为酶标抗体检测DT抗原的含量,对双抗体夹心ELISA进行方法学验证。结果 DT抗原含量在0～0.125 Lf/mL范围内反应曲线线性关系良好（r=0.996）,8次重复实验的r值为0.995～0.997。该方法与破伤风类毒素（TT）抗原、百日咳类毒素（PT）抗原、百日咳丝状血凝素（FHA）抗原和百日咳黏附素（PRN）抗原无明显交叉反应,特异性较好。精密度验证变异系数为1.445%～4.431%,准确度验证回收率为91.86%～105.47%,准确检测范围为0.001 953 125 Lf/mL～0.125 Lf/mL,定量限为0.001 953 125 Lf/mL。分别采用双抗体夹心ELISA和絮状单位测定法测定6批类毒素原液中DT抗原的含量,结果显示2种检测方法呈高度相关（r=0.974）,检测结果差异无统计学意义（P＞0.05）。结论双抗体夹心ELISA灵敏度高,特异性强,能准确测定DT抗原的含量,可用于白喉疫苗生产工艺过程各阶段的抗原含量测定。