Specific CEA-producing colorectal carcinoma cell killing with recombinant adenoviral vector containing cytosine deaminase gene

摘要

瞄准：到杀死 CEA 积极颜色明确地使用 E 关口 i cytosine 脱氨基酶(CD ) 的表面的癌房间自杀基因，新复制缺乏的 recombinant adenoviral 向量在在哪个 CD，基因在 CEA 倡导者下面被控制被构造并且它的在里面 vitro 细胞毒素的效果被评估。方法：梭原生质标志包含 CD 基因和 CEA 基因的规章的顺序在 293 房间紧张与侵入人体气管粘膜的病菌染色体 DNA 的右手臂被构造并且重新结合。点弄污， PCR 被用来识别积极的匾。侵入人体气管粘膜的病菌的纯化被执行与在 CsCl 步坡度和滴定极端集中与匾形成试金被测量。细胞毒素的效果是有 MTT 方法的 assayed， 5-FC 的百分之五十抑制集中(IC (50 )) 用一个曲线试穿参数被计算。表面的癌房间线，是生产 CEA，和 CEA-nonproducing Hela 房间衬里的人的颜色在 cytological 测试被使用。确定的 recombinant 侵入人体气管粘膜的病菌向量 AdCMVCD， CD 基因在 CMV 倡导者下面在被控制，被用作病毒控制。量的结果被表示为平均数的吝啬的 +/- SD。统计分析用 ANOVA 测试被执行。结果：需要的 recombinant 侵入人体气管粘膜的病菌向量被称为 AdCEACD。点弄污和 PCR 的结果证明 recombinant 侵入人体气管粘膜的病菌包含了 CEA 倡导者和 CD 基因。病毒 titer 是大约 5.0 X 10 (14 ) pfu/L (在纯化以后的 -1) 。 生产CEA Lovo 房间对 5-FC 敏感并且与 AdCEACD 和 AdCMVCD 在感染以后有一样的细胞毒素的效果(在父母 Lovo 房间，感染 100 M.O.I AdCEACD 的 Lovo 房间和感染 10 M.O.I AdCMVCD 的 Lovo 房间的 5-FC 的 IC ( 50 )价值是 15000 ， 216.5+/-38.1 和 128.8+/-25.4 micromol.L (-1), P0.001 ，分别地)，并且当侵入人体气管粘膜的病菌的 m.o.i 被提高时， 5-FC 的 cytotoxicity 因此增加了( 5-FC 的 IC ( 50 )的价值被归结为 27.9+/-4.2 micromol.L (在 1000 M.O.I AdCEACD 的-1)感染了 Lovo 房间和 24.8+/-7.1 micromol.L (在 100 M.O.I AdCMVCD 的-1)感染了 Lovo 房间， P0.05 ， P0.01 ，分别地)。CEA-nonproducing Hela 房间没与 AdCEACD 在感染以后有效果，但是 Hela 房间与 AdCMVCD 在感染以后有细胞毒素的敏感到 5-FC (在在 10 M.O.I 感染 AdCMVCD 的父母 Hele 房间和 Hela 房间的 5-FC 的 IC (50 ) 是 15000 和 214.5+/-31.3 micromol.L (-1), P0.001 ) 。AdCEACD/5-FC 系统也有旁观者效果，并且当 transfected 房间的比例仅仅是 10% 时，生存能力是大约 30% 。结论：recombinant 侵入人体气管粘膜的病菌向量 AdCEACD 有房间的特性类型特定的基因交货。AdCEACD/5-FC 系统可以变得一新，为 CEA 积极的瘤的基因治疗的有势力和特定的途径，特别结肠癌。