卵巢癌细胞中hCTR1的表达与细胞对顺铂耐药的相关研究

摘要

目的:探讨人铜离子转运蛋白1(human copper transporter 1,hCTR1)与卵巢癌细胞对铂类药物耐药的关系.方法:构建重组反转录病毒载体pBABEpuro-hCTR1,转染包装细胞后感染人卵巢癌细胞株SKOV-3,用嘌呤霉素筛选得到稳定表达hCTR1的pBABEpuro-hCTR1/ SKOV-3细胞.应用实时荧光定量.PCR(real time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western 印迹法检测pBABEpuro-hCTR1/ SKOV-3细胞中hCTR1 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测顺铂(cisplatin, DDP)对pBABEpuro/SKOV-3和pBABEpuro-hCTR1/SKOV-3细胞的增殖抑制率,FCM检测DDP对上述细胞周期的影响,电感耦合等离子质谱法(ion-coupled plasma-mass spectroscopy,ICP-MS)测定细胞内的铂含量.结果:成功构建了hCTR1高表达的SKOV-3稳定细胞株.DDP对pBABEpuro-hCTR1/SKOV-3细胞的IC50值为(18.97±1.24)μmol/L,对pBABEpuro /SKOV-3细胞的IC50值为(29.35±2.12)μmol/L(P<0.01).DDP对pBABEpuro-hCTR1/SKOV-3细胞的S期阻滞作用大于pBABEpuro/SKOV-3细胞.pBABEpuro-hCTR1/SKOV-3细胞对DDP的摄入能力大于pBABEpuro/SKOV-3细胞.结论: hCTR1参与卵巢癌细胞对DDP的转运,其高表达可增强SKOV-3细胞对DDP的摄入能力和敏感性.