Chelex100法从贮存食管拉网脱落细胞涂片中提取DNA并作PCR分析的应用和意义

摘要

目的探讨从贮存20年的食管拉网脱落细胞涂片的微量细胞中抽提DNA的方法和可行性;比较p53基因在正常食管上皮和重度不典型增生上皮中的突变差异.方法利用螯合型离子交换树脂Chelex100作为介质,一步法从食管拉网脱落细胞中提取用作PCR分析的DNA,共提取食管正常上皮与重度不典型增生上皮细胞涂片各24例,采用PCR-SSCP分析法进行p53基因第7外显子的突变检测.结果所有48例标本中微量细胞的DNA抽提均获成功;正常食管组p53基因第7外显子均未发生突变,重度不典型增生组5例发生突变,其中3例在10年、12年、14年后转变为食管癌.结论 Chelex100法简便、高效,能从微量细胞中抽提DNA,使对20年前食管拉网细胞涂片进行分子水平的检测成为可能;p53基因第7外显子的突变使食管上皮重度不典型增生细胞具有了癌变趋势.