不同核质蛋白分离条件对研究核转位分子的分布的影响

摘要

目的:研究不同核质蛋白分离条件对于研究核转位分子的分布的影响.方法:选取巨噬细胞系RAW264.7,采用不同的裂解时间和离心条件提取核蛋白和胞质蛋白,并利用针对不同组分的内参蛋白及信号转导及转录激活蛋白6(Signal transducer and activator of transcription,STAT6)的抗体进行Western Blot(WB),分析最佳分离条件和STAT6的核质分布情况.结果:冰上裂解1-3 min均能达到不错的分离效果,同时随着离心时间延长,分离效果越好,离心10 min、12000 g是分离巨噬细胞核质蛋白的最佳条件.RAW264.7细胞中,STAT6大部分在胞质中,少量在胞核中.结论:本研究建立了快速、有效的分离核质蛋白的方法(冰上裂解1-3 min,提取胞质蛋白的离心时间为10 min),为分析信号转导中核转位分子提供了研究方法.