脂多糖致HUVEC细胞凋亡和线粒体跨膜电位损伤影响

摘要

目的:探讨不同浓度脂多糖致HUVEC细胞凋亡和线粒体跨膜电位损伤相关性.方法:体外培养人脐静脉血管内皮细胞株 (HUVEC),先将脂多糖(LPS)分为100、10、1、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5 μg·ml-18个浓度,刺激0.5、1、2、6、12、24 h后用CCK-8法观察细胞增殖影响进行初筛,之后选择脂多糖(LPS)分为100、10、1、10-1、10-2 μg·ml-15个浓度刺激HUVEC细胞株12h,AnneximV/FITC双染后流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察Hochest33342/PI双染后细胞形态,罗丹明染色后荧光显微镜检测细胞线粒体跨膜电位变化.结果:同阴性对照组比较,LPS浓度≥10-2μg·ml-1刺激12、24 h均可引起细胞活力明显下降(P＜0.05),其余浓度引起HUVEC细胞活力下降时间不等.LPS致细胞凋亡率随浓度增加而增加,分别为67.2％、43.5％、23.5％、17.3％、10.6％,呈剂量依赖性;Hochest33342/PI双染显示10-1μg·ml-1以上浓度组HUVEC即出现核浓缩和凋亡小体,甚至有少量死亡细胞;10-1μg·ml-1以上浓度组细胞荧光较强,线粒体跨膜电位降低.结论:10-1 μg·ml 1以上浓度LPS刺激12h可致HUVEC细胞凋亡,线粒体跨膜电位下降;LPS10-1μg·ml-1刺激HUVEC 12 h即可致理想的细胞凋亡模型.