创伤性脑组织匀浆条件下川芎嗪对骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的最佳诱导剂量研究

摘要

目的观察创伤性脑组织匀浆条件下,川芎嗪诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经元样细胞的分化,并寻找川芎嗪的最佳诱导浓度。方法①Wistar幼鼠麻醉后,取其股骨、胫骨和肱骨,从骨髓中分离BMSCs,接种于培养瓶培养并传代,于倒置显微镜下观察细胞形态。②采用Feeney自由落体撞击法制作中度脑损伤大鼠模型,取伤后24h大鼠创伤脑组织制作匀浆,用含1.00,1.15,1.30,1.45g/L 4种剂量盐酸川芎嗪的达氏修正伊氏培养基(DMEM)对体外培养的第4代BMSCs诱导12h。③倒置显微镜下观察细胞诱导后形态学变化,应用免疫细胞化学染色技术检测细胞内神经元特异性烯醇化酶(NSE)和细胞巢蛋白(Nestin)的表达,并比较4种剂量川芎嗪诱导后各组神经元样细胞抗原的表达率。结果原代细胞接种3d后多数细胞贴壁,传代后细胞贴壁速度和增殖更快,诱导后细胞出现类似神经元细胞样形态;免疫细胞化学方法检测显示多数细胞巢蛋白、NSE阳性表达,1.30g/L浓度组细胞的NSE阳性表达率最高,表达量为(66.4±4.7)%,细胞巢蛋白表达量为(62.23±4.47)%。结论川芎嗪可诱导BMSCs分化为神经元样细胞,在创伤性脑组织匀浆条件下1.30g/L为其最适诱导剂量。