规模养羊户山羊暴发边缘无浆体病的确诊

摘要

2015年7月23日，云南红河州蒙自市新安所镇兽医站按防疫要求对当地2户山羊养殖户饲养的云南黑山羊进行小反刍兽疫疫苗接种，山羊存栏数总计323头，怀孕后期母羊未接种，实际接种297头。疫苗接种后第2 d ，部分羊开始出现绿色水样腹泻症状，第4 d出现羊的死亡，至8月22日已发病死亡32头（小羊4头、中大羊28头），此时户主才将疫情报告给兽医站并请求派技术人员进行诊疗。发病山羊体温正常，未见有明显眼、鼻分泌物，呈现顽固性、持续性腹泻，部分羊有咳嗽等呼吸道症状，羊饮食欲尚可，但精神委顿，消瘦、脱水，喜卧，眼结膜及巩膜苍白，血液极度稀薄，凝固不良，病理解剖检查心脏肌肉极度柔软，胸腔、腹腔、肠系膜可见囊尾蚴存在，肠道内可见线虫、绦虫等寄生虫，胆囊肿大充盈，肾脏肿大，腹腔大网膜及肠系膜有半透明胶冻样物质存在，其余脏器未见异常。采集新鲜血液制作血涂片染色及生理盐水悬液镜检，可见血细胞数量稀少，大部分红细胞呈不规则样形变，红细胞膜有数量不一的脊状凸起，凸起部位经染色后呈蓝紫色。采集新鲜ED T A‐K2抗凝血检验血液细胞，结果提示发病山羊呈贫血状态。采集病死山羊大脑、心肌、肺脏、肾脏、肝脏、脾脏、肺门淋巴结、肠系膜淋巴结及粪便样品抽提病毒或细菌基因组DNA／RNA ，经小反刍兽疫、传染性胸膜肺炎、隐孢子虫、伪狂犬、乙型脑炎、阿卡斑、山羊脑炎－关节炎、贝纳特氏立克次体、岗地弓形虫real‐time PCR／RT‐PCR／PCR检测后结果均为阴性。采集EDTA‐K2抗凝血抽提血液基因组DNA经巴贝斯焦虫、泰勒焦虫、无浆体及埃利希氏体PCR检测后，扩增出边缘无浆体目的基因片段，其余检测结果均为阴性。PCR产物经切胶回收纯化后测序，所得序列在NCBI GenBank 中Blast ，结果与边缘无浆体（Anaplasma marginale）参考株Florida株（Accession No ．：NC‐012026．1）基因序列同源性达91％。结合此次疫情的临床症状、病理变化、血液细胞分析、血涂片及生理盐水悬滴液镜检及无浆体PC R扩增及序列分析结果，最终确诊引起此次疫情的病原为边缘无浆体。至10月30日疫情结束时，总计山羊发病206头，死亡174头，发病率53．9％，病死率84．5％。