温度变化对M1GS的结构和活性的影响

摘要

为研究M1GS的二级结构和活性随温度变化的规律,以人巨细胞病毒DNA聚合酶基因(UL54)为靶基因,构建了具有切割效率的核酶M1GS-T7.采用维也纳大学RNA二级结构预测与比较软件包分别对20℃,37℃,55℃的M1GS-T7进行二级结构模拟,并对20℃,37℃,55℃下的核酶的体外切割活性进行比较.软件模拟结果显示,对比37℃和20℃的M1RNA的结构,两者的碱基互补性存在明显差异,活性区域无法形成;对比37℃和55℃的M1RNA结构,两者只有M1RNA的活性中心存在差别,非活性部位改变较少.体外切割实验结果显示,20℃的M1GS-T7未显示体外切割活性,而55℃的M1GS-T7比37℃的M1GS-T7活性提高了30%.结果说明,活性部位的形成是核酶有活性的必要条件,且活性部位相对于非活性部位有较高的柔性.