人工合成的亚硝基化合物MNNG致人胃黏膜上皮细胞恶性转化模型的建立及机制分析

摘要

目的 建立人工合成的亚硝基化合物N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)暴露致人胃黏膜上皮细胞GES-1恶性转化的模型,并分析其作用机制.方法 取GES-1细胞,分为空白对照组、溶剂对照组和MNNG诱导组.空白对照组正常培养,MNNG诱导组在培养基中加入2μmol/L的MNNG,溶剂对照组加入等体积的DMSO.常规培养4周.于实验第5周行病理染色观察三组细胞形态,细胞克隆形成实验检测细胞克隆能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blotting法检测细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ、Beclin1表达,qPCR法检测LC3Ⅱ、Beclin1 mRNA表达,裸鼠成瘤实验检测各组细胞成瘤能力.结果 MNNG诱导组细胞体积增大,形态不规则,排列紊乱,部分细胞呈团块状生长,部分细胞呈梭形.与空白对照组相比,MNNG诱导组细胞克隆形成数目明显增多,细胞迁移速度增高(P均<0.05),LC3Ⅱ、Beclin1蛋白及mRNA表达水平降低(P均<0.05),裸鼠成瘤能力增加.结论 成功建立MNNG致人胃黏膜上皮细胞恶性转化模型,其机制可能与自噬相关.