干扰素-γ作用后的小鼠肺微血管内皮细胞对共培养T淋巴细胞增殖的影响及机制

摘要

目的 探讨干扰素-γ(IFN-γ)作用后的小鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)对共培养T淋巴细胞增殖的影响,并探讨其可能的机制.方法 分离雌性Balb/C小鼠肺组织,采用组织块贴壁法培养PMVECs;经倒置显微镜、透射电镜观察及内皮细胞表面标志CD31荧光检测鉴定,证实为PMVECs且纯度>95％.在Transwell板下层小室中加入PMVECs,随机分为空白对照组、10 ng/mL组、20 ng/mL组、50 ng/mL组、80 ng/mL组,加入终浓度分别为0、10、20、50、80 ng/mL的IFN-γ,Transwell板上层小室中加入T淋巴细胞进行共培养,采用流式细胞术检测上层小室T淋巴细胞增殖指数.将第3代PMVECs随机分为观察组和对照组,分别加入终浓度为80 ng/mL的IFN-γ及等量PBS;采用反相高效液相色谱法检测细胞培养上清中色氨酸、犬尿氨酸水平及吲哚胺2,3-加氧酶(IDO)活性,RT-PCR法及Western blotting法检测细胞IDO mRNA及蛋白表达.结果 空白对照组、10 ng/mL组、20 ng/mL组、50 ng/mL组、80 ng/mL组T淋巴细胞增殖指数分别为3.06±0.07、2.93±0.09、2.46±0.28、2.21±0.41、2.20±0.05,20 ng/mL组、50 ng/mL组、80 ng/mL组T淋巴细胞增殖指数均低于空白对照组(P均0.05).观察组细胞培养上清中色氨酸水平低于对照组,犬尿氨酸水平及IDO活性均高于对照组(P均<0.01).观察组和对照组细胞IDO mRNA相对表达量分别为0.68±0.02、0,IDO蛋白相对表达量分别为0.49±0.02、0;两组比较P均<0.01.结论 IFN-γ作用后的PMVECs可抑制共培养的T淋巴细胞增殖,其机制可能与促进色氨酸降解、犬尿氨酸累积及IDO表达有关.