^(3)H-油酸标记的大肠杆菌底物测定血清磷脂酶A2活性的方法及评价

摘要

目的 :探讨血清磷脂酶 A2 ( PLA2 )活性测定动力学特点并进行方法学评价。方法 :采用 [3 H]-油酸标记大肠杆菌膜为底物 ,观察不同条件下 PLA2的作用特点 ,选择最适反应条件 ,并进行方法学评价试验。结果 :PLA2的最适 p H为 8.0～ 8.5;当 Ca2 + ≤ 8nmol/ L时 ,PLA2活性呈 Ca2 + 浓度依赖性 ;PLA2催化水解大肠杆菌膜磷脂的反应有底物饱和性 ,其表观 Km为 6.0 μmol/ L;血清用量在 2～ 1 4μl内呈线性关系 ( r=0 .92 4 8,P<0 .0 5) ;蛇毒 PL A2在 0 .5～ 1 0 ng范围内呈线性 ( r=0 .960 4 ,P<0 .0 1 ) ;当血清用量为 1 0 μl,反应在 2 5min内呈线性 ( r=0 .92 99,P<0 .0 0 5)。批内 CV为 6.2 % ,批间 CV为 9.3% ,回收率为 92 .6% ;轻度溶血、1 .0 6mmol/ L的 TG及 0 .1 6mmol/ L的 Triton X- 1 0 0对该法无明显干扰 ;48例健康人血清 PLA2活力的 95%可信区间为 461 .9～ 62 3.2 u/ L ( x± t0 .0 5,v Sx)。结论 :以 [3 H]-油酸标记的大肠杆菌膜为底物测定血清磷脂酶 A2活力是一种灵敏度极高 ,特异性较强 ,准确度满意的放射化学分析法。该法较为简单、快速。