微量生物检材定量检测灵敏度的评估与应用

摘要

目的:引入扩增前定量,依据定量结果指导下步检验,从而提高DNA检验的科学性和有效性.方法:用Globalfiler试剂盒对标准品007进行25ul体系29循环、30循环、32循环以及10ul体系29循环的扩增比较,通过分析检出率和非特异性扩增率来确定针对微量检材的最优检验方案.结果:随着模板浓度的增加和循环数增加,检出率逐渐提高,但32循环非特异性扩增率高于30循环.007浓度在20pg以下时,检出率不足50％,007浓度在100pg时,检出率达到99.1％.当按比例减少扩增体系至10ul及模板DNA的量,检出率也会随之降低.结论:在日常检案中,如果定量后模板DNA量在20pg以下时,即可停止后续扩增检测.对于定量后模板DNA量在20pg以上的微量DNA,除了无水扩增保证模板量外,还可以采用25ul体系增加至30循环(最多不超过32循环)的方法来平行扩增提高分型成功率.