小鼠视网膜铺片免疫荧光染色技术的探讨

摘要

目的 探讨一种简便、易操作的小鼠视网膜铺片免疫荧光染色技术.方法 30只C57BL/6J成年小鼠行40 g·L-1多聚甲醛心脏灌注固定,摘取眼球,剥离视网膜,随机分为3组:A组20个视网膜直接置于3 g·L-1 Triton X-100中4℃孵育1 h;B组20个视网膜先置入甲醇冰上固定30 min,再置于3 g·L-1 Triton X-100中4℃孵育1 h;C组20个视网膜先置入甲醇冰上固定30 min,再置于3 g·L-1 Triton X-100中4℃孵育过夜.各组分别行α-平滑肌肌动蛋白免疫荧光染色,荧光显微镜下照相,观察其差异.结果 荧光显微镜下观察,A组视网膜血管荧光微弱,血管模糊不清;B组视网膜可见荧光,血管分枝清晰可见,但荧光较弱;C组视网膜荧光强亮,α-平滑肌肌动蛋白特异性表达在血管内皮细胞及周细胞的胞膜上,荧光呈空泡状,背景染色轻.结论 视网膜铺片免疫荧光染色是一种较好的、简便易行的视网膜组织形态学观察方法,实验过程中甲醇脱脂处理和足够的Triton X-100浸泡是保证染色成功的关键.