保护 HLA-DR3转基因鼠抗结核杆菌感染的复合期多表位疫苗

摘要

结核分枝杆菌（Mtb）每年导致近200万人死亡。BCG是当前唯一使用的结核病疫苗，能够诱导不恒定的保护力，不能防止潜伏性结核病的复活。因此，急切需要有效的疫苗来补充BCG。由于在细菌的繁殖阶段与休眠阶段结核分枝杆菌的蛋白质组在性质和数量上不同，所以改良的结核病疫苗应该能够诱导产生对感染各个阶段表达的结核分枝杆菌抗原的免疫应答。因此，这种“复合期”疫苗应该由结核分枝杆菌感染不同阶段表达的（免疫决定簇）抗原组成。作为一个概念性多级疫苗，我们通过融合五种HLA—DR3限制性T细胞表位构建了一个多表位肽（polyepitope），这些限制性表位来源于不同的结核分枝杆菌蛋白，有繁殖期高表达产物（Ag85B，hsp65，19kDa脂蛋白），有休眠菌富表达而且经结核菌素皮下测试阳性（TST＋）个体验证的产物（hspl6，Rvl733c）。在体外试验中，结核病治愈后HIA-DR3＋而非HLA-DR3-病人和结核菌素皮下测试阳性个体的外周血单核细胞对复合期多表位肽反应良好。使用缺乏内源性鼠Ⅱ类基因的HIA—DR3转基因小鼠模型，在体内分析了复合期多表位肽的免疫原性和保护效力。用CpG做佐剂的复合期多表位肽免疫动物产生了高水平的IgG以及多功能CD4’T细胞，它们能够产生HLA-DR3限制性表位特异性的IFN-y、TNF和IL-2。重要的是，当作为预防性疫苗时用结核菌攻击之后，复合期多表位肽的免疫降低了肺部结核杆菌的数量。考虑到可用于免疫识别的潜在Mtb抗原的广谱性，我们的模型数据证明了复合期多表位肽疫苗预防结核病的潜力。