人微小纤溶酶原活性中心丝氨酸突变体基因在毕赤酵母中的表达

摘要

用PCR方法将编码人微小纤溶酶原 (microplasminogen ,mPlg)活性中心Ser的密码子置换为Ala密码子 ,突变体cDNA与分泌型酵母表达载体 pHIL D8重组 ,构成受醇氧化酶基因 (AOX1)的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒 ,转化GS115酵母菌 ,经表型筛选、PCR扩增筛选阳性克隆 ,以甲醇诱导表达 ,Mm Plg分泌至培养液 ,经Westernblot证实。培养液经离心 ,上清与重组葡激酶 (Staphylokinase,Sak)孵育后 ,以酪蛋白 琼脂糖平板溶圈法、发色底物法检测 ,MmPlg未显示纤溶活性。