PARK7通过调控Trx2对缺糖缺氧诱导的大鼠皮质神经元Necroptosis的保护机制

摘要

目的 探讨帕金森病蛋白7(PARK7)在缺糖缺氧诱导的大鼠皮质神经元Necroptosis信号通路中调控硫氧还蛋白2(Trx2)对NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体介导的炎性反应的抑制作用.方法 ①实验一:分为正常对照组、缺糖缺氧+Caspase抑制剂组、DNCB组.SD大鼠皮质神经元细胞培养至12 d,缺糖缺氧+Caspase抑制剂组、DNCB组均给予Caspase抑制剂预处理,DNCB同时给予DNCB预处理,缺氧2 h/复氧12 h,Western blot检测线粒体中Trx2蛋白表达情况,全自动生化分析仪检测培养基中乳酸脱氢酶(LDH)水平.②实验二:分为正常对照组、缺糖缺氧+Caspase抑制剂组、慢病毒敲减PARK7组(sh PARK7组)、慢病毒扩增PARK7组(OE-PARK7组),各组给予相应处理后,Western blot检测PARK7、Trx2、NLRP3、IL-1β蛋白表达情况,全自动生化分析仪检测培养基中LDH水平.③实验三:TrxR活性检测分为正常对照组、缺糖缺氧+Caspase抑制剂组、DNCB组、sh PARK7组、OE-PARK7组、sh PARK7+DNCB组、OE-PARK7+DNCB组,各组给予相应处理后检测TrxR活性;神经元受损程度实验分为正常对照组、缺糖缺氧+Caspase抑制剂组、DNCB组、OE-PARK7组和OE-PARK7+DNCB组,各组给予相应处理后,检测缺氧2 h和复氧2 h、6 h、12 h、24 h后LDH水平.结果 ①DNCB组Trx2表达水平与缺糖缺氧+Caspase抑制剂组比较差异无统计学意义(P>0.05),LDH水平明显高于缺糖缺氧+Caspase抑制剂组(P0.05);sh PARK7+DNCB组、OE-PARK7+DNCB组TrxR活性均明显低于sh PARK7组、OE-PARK7组(P均<0.05).随着复氧时间延长,各组LDH水平均升高,且DNCB组LDH水平均明显高于缺糖缺氧+Caspase抑制剂组和OE-PARK7组(P均<0.05),OE-PARK7+DNCB组LDH水平均明显高于OE-PARK7组(P均<0.05).结论 缺糖缺氧诱导的大鼠皮质神经元Necroptosis信号通路中,PARK7可通过下调Trx2抑制NLRP3介导的炎性反应,该过程中TrxR是PARK7抗氧化应激保护作用必需的细胞因子.