补肾活血汤对大鼠骨髓间充质干细胞体外成骨分化影响的研究

摘要

目的研究补肾活血汤对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外成骨分化的影响,并探讨Wnt/β-catenin信号通路在其中的调控作用。方法将20只6周龄SD大鼠随机分为对照组和补肾活血汤组,分别给予生理盐水和补肾活血汤灌胃7 d后取血制备空白血清和含药血清。采用全骨髓培养法获取8周龄SD大鼠BMSCs,传至第3代用于实验研究。流式细胞仪检测BMSCs表型、纯度。实验分为3组:空白对照组细胞加入空白血清培养,补肾活血汤含药血清组细胞加入含药血清培养,经典成骨诱导剂组细胞加入含经典成骨诱导剂的空白血清培养。CCK-8法检测3组细胞干预1~4 d的增殖率,酶标仪检测3组细胞干预14 d后碱性磷酸酶活性,茜素红染色观察3组细胞干预21 d后成骨情况,RT-PCR法检测3组细胞干预21 d后Wnt/β-catenin信号通路相关因子(Wnt3a、β-catenin、CyclinD1、Runx2)mRNA表达情况。结果第3代BMSCs纯度高。补肾活血方含药血清组干预3 d和4 d的细胞增殖率均明显高于同期空白对照组和经典成骨诱导剂组(P均<0.05);补肾活血方含药血清组和经典成骨诱导剂组碱性磷酸酶活性均明显高于空白对照组(P均<0.05);茜素红染色,空白对照组未见明显紫红色阳性区域,补肾活血方含药血清组和经典成骨诱导剂组可见片状阳性区域;补肾活血方含药血清组和经典成骨诱导剂组Wnt3a、β-catenin、CyclinD1、Runx2 mRNA相对表达量均明显高于空白对照组(P均<0.05)。结论补肾活血汤可以通过激活Wnt/β-catenin信号通路诱导大鼠BMSCs成骨分化。