甲钴胺对牙髓干细胞体外成神经向分化的影响

摘要

目的 探讨甲钴胺对兔牙髓干细胞体外成神经向分化的影响.方法 无菌环境下取出兔牙髓组织,分离培养兔牙髓干细胞.分别以25、50、100 mg/L的甲钴胺处理3 d后,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,蛋白免疫印迹法检测巢蛋白(Nestin)的表达.选取100 mg/L的甲钴胺进行神经诱导,采用蛋白免疫印迹法和免疫荧光染色检测神经丝H(NF-H)和S100的表达,茜素红染色观察矿化结节.结果 与对照组相比,不同浓度甲钴胺处理3 d后均可促进兔牙髓干细胞Nestin的表达,且对细胞活性无明显影响,100 mg/L甲钴胺组Nestin蛋白表达量高于50 mg/L甲钴胺组和25 mg/L甲钴胺组[(0.959±0.008)比(0.862±0.019)、(0.689±0.031)](P<0.05).神经诱导实验显示,100 mg/L甲钴胺能促进兔牙髓干细胞NF-H和S100的表达,甲钴胺+神经诱导液组NF-H和S100的表达量均明显高于单纯诱导液组[(0.939±0.021)比(0.710±0.030)、(0.867±0.015)比(0.761±0.018)](P<0.05).免疫荧光染色显示,100 mg/L的甲钴胺诱导后牙髓干细胞NF-H和S100呈阳性表达.茜素红染色结果显示,经过100 mg/L甲钴胺处理3 d后细胞排列呈以矿化结节为中心的火山口样、漩涡状,局部聚集成灶,矿化结节数多于对照组[(2.41±0.14)个比(0.82±0.11)个](P<0.05).结论甲钴胺在体外能够促进兔牙髓干细胞的成神经向分化,可为临床上应用甲钴胺及牙髓干细胞治疗面神经损伤提供理论依据.