重组人血管能抑制素分泌型表达载体的构建及其生物学效应研究

摘要

目的构建表达分泌型人血管能抑制素(canstatin)蛋白的真核表达载体,观察其生物学效应.方法以SOE PCR法将canstatin及癌胚抗原(CEA)引导肽cDNA体外连接,并定向克隆到真核蛋白表达载体pCMV-Script上,脂质体介导转染HUVEC及A549细胞,荧光定量PCR法检测转染细胞canstatin基因表达量,并采用多种方法检测该重组载体的生物学活性.结果成功构建canstatin分泌型载体,在其转染的肿瘤细胞和人脐静脉内皮细胞中均检测到不同拷贝数的表达.转染后HUVEC生长增殖缓慢,出现G0～G1期阻滞并伴有大量凋亡,与空载体转染组相比差异有统计学意义(P<0.05);而A549细胞转染后与空载体转染组在以上几个方面差异均无统计学意义(P>0.05).重组载体转染A549细胞上清液干预的鸡胚绒毛尿囊膜血管生成明显减少,且颜色苍白、轮廓模糊,空载体转染组和未干预组血管生长旺盛、脉络清晰.结论 SOE法构建的含有CEA引导肽的canstatin分泌型表达载体能在转染的内皮细胞及肺癌细胞中稳定表达,可有效抑制内皮细胞生长增殖并诱导凋亡.重组载体转染的细胞可分泌有生物学活性的canstatin.