小菊锌指蛋白基因cDNA全长克隆及表达分析

摘要

目的:克隆菊花耐盐碱相关锌指蛋白基因,并进行盐胁迫和品种间差异的表达分析.方法:从大量菊花资源中筛选出抗盐碱品系小菊'阳光',利用RT-PCR从经150 mmol/L碳酸钠处理的小菊'阳光'叶片中分离得到一个锌指蛋白cDNA全长克隆,用Northern杂交检测其在不同盐处理和不同品种小菊中的表达.结果:获得了全长794 bp的基因CmSTZF(GenBank接受号为DQ864730),编码区为170个氨基酸残基.Blast分析表明,CmSTZF含有AN1型锌指结构,序列模式为C-X2-C-X(9-12)-C-X(1-2)-C-X4-C-X2-H-X5-H-X-C,由Cys110-Cys113-Cys131-His134及Cys124-Cys126-Cys142-His140分别围绕锌离子与其他氨基酸共同组成2个锌指四面体结构;在第67～76及第94～104氨基酸残基序列间存在核定位信号.同源性比较发现,CmSTZF与水稻OsISAP1具有54%的同源性,而二者的锌指保守区相似性达100%.Cluster分析表明,小菊CmSTZF锌指蛋白与水稻的2种逆境反应蛋白亲缘关系最近,归属同一类逆境功能蛋白.在150 mmol/L碳酸钠胁迫下,耐盐小菊'阳光'锌指蛋白表达量明显高于非耐盐小菊'神韵',表明CmSTZF锌指蛋白基因在盐碱胁迫下起重要的调控作用.结论:克隆了小菊耐盐碱相关的锌指蛋白基因CmSTZF,其在耐盐小菊'阳光'中的表达量高于非耐盐小菊'神韵',这为小菊锌指蛋白基因CmSTZF耐盐碱功能分析奠定了基础.