改良的降落PCR与普通PCR结果比较

摘要

目的:设计并验证一改良的降落PCR(MTD-PCR)程序.方法:自盐藻bardawil中提取基因组DNA作为PCR模板,使用Taq DNA聚合酶及pfu DNA聚合酶,运用普通PCR和MTD-PCR程序,扩增胡萝卜素生物合成相关基因(cbr)上游启动子序列,并电泳比较PCR扩增产物的特异性.结果:使用普通Taq酶进行PCR,普通PCR程序产生200 bp,500 bp和1 272 bp 的3条带, 而MTD-PCR程序仅克隆出1 272 bp的特异带;利用高保真的pfu DNA聚合酶作PCR,在MTD-PCR泳道中也仅有1 272 bp 1条带,而普通PCR除了产生1 272 bp的特异带外,还出现1条500 bp的非特异带.结论:无论使用普通Taq酶或高保真酶pfu,改良的MT-PCR程序均明显提高PCR的特异性,提示它可用于克隆普通PCR难以克隆的基因片段,或在假阳性难以去除的情况下提高PCR的特异性.